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標(biāo)本溶血對(duì)檢測(cè)乙肝表面抗原的影響
在臨床檢測(cè)中，常常遇到溶血的標(biāo)本。溶血對(duì)ELISA檢測(cè)乙肝表面抗原(HBsAg)究竟是否有影響?下面是yjbys小編為大家?guī)?lái)的標(biāo)本溶血對(duì)檢測(cè)乙肝表面抗原的影響，歡迎閱讀。
一、標(biāo)本溶血的原因
溶血是臨床檢驗(yàn)中最常見(jiàn)的一種干擾和影響因素。溶血可分為體內(nèi)溶血和體外溶血[1]。體內(nèi)溶血可由物理因素(如人工心臟瓣膜或大血管手術(shù)后)、化學(xué)因素(如惡性瘧)和藥物毒性反應(yīng)等因素引起。體外溶血可由物理因素(抽血時(shí)負(fù)壓過(guò)大、水浴溫度過(guò)高、冰凍、振蕩等機(jī)械性破壞)、化學(xué)因素(血樣接觸表面活性劑)和代謝因素(如遺傳病引起紅細(xì)胞脆性增加)引起。
在臨床上常見(jiàn)的引起標(biāo)本溶血的原因包括[2]:由于病人嚴(yán)重脫水、低血容量休克等原因?qū)е麓┐汤щy造成的溶血;由于抽血器具質(zhì)量不合格如真空管負(fù)壓不夠或塑料試管質(zhì)量較差導(dǎo)致的溶血;用干燥管采血為了盡快分離血清用竹簽攪拌不當(dāng)引起的溶血等。
二、標(biāo)本溶血對(duì)乙肝表面抗原檢測(cè)的影響
一些研究沒(méi)有發(fā)現(xiàn)標(biāo)本溶血對(duì)HBsAg檢測(cè)的影響。李穗芬[3]對(duì)20例HBsAg陰性和10例HBsAg陽(yáng)性病人的溶血和非溶血標(biāo)本包括10例OD值在臨界值附近的標(biāo)本進(jìn)行了對(duì)照，結(jié)果非溶血和溶血標(biāo)本的陰、陽(yáng)性結(jié)果完全一致。20例HBsAg陰性和10例OD值在臨界值附近的樣本，溶血與對(duì)應(yīng)非溶血標(biāo)本OD值間差異沒(méi)有顯著性;10例HBsAg陽(yáng)性樣品，溶血標(biāo)本OD值明顯大于對(duì)應(yīng)非溶血標(biāo)本OD值。因此得出結(jié)論，標(biāo)本溶血不影響HBsAg結(jié)果的判定，只是使HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本的OD值提高。
許斌等[4]對(duì)HBsAg強(qiáng)陽(yáng)性樣品的非溶血與溶血(Hb濃度為241g/L)標(biāo)本的A值作了對(duì)照后未發(fā)現(xiàn)兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，得出結(jié)論:溶血對(duì)HBsAg的檢測(cè)沒(méi)有影響(嚴(yán)格意義上應(yīng)表述為:溶血對(duì)HBsAg強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本的檢測(cè)沒(méi)有影響)。單桂秋等[5]的研究也顯示，HBsAg陽(yáng)性樣品的非溶血與溶血標(biāo)本的A值間經(jīng)t檢驗(yàn)差異無(wú)顯著性。
其他的一些研究則發(fā)現(xiàn)，溶血對(duì)HBsAg的檢測(cè)有影響。錢(qián)厚明等 [6]發(fā)現(xiàn)，在17例溶血標(biāo)本中，初檢的5例HBsAg陽(yáng)性標(biāo)本，經(jīng)重新抽血復(fù)檢后有2例仍為陽(yáng)性，另3例轉(zhuǎn)陰。認(rèn)為是溶血導(dǎo)致了假陽(yáng)性的出現(xiàn)。劉玉振等[7]研究發(fā)現(xiàn)，溶血對(duì)HBsAg的檢測(cè)有影響，當(dāng)紅細(xì)胞濃度>25%造成的溶血可導(dǎo)致假陽(yáng)性。龍憲和等[8]研究發(fā)現(xiàn)，無(wú)論在健康人還是乙肝病毒感染者中，溶血均導(dǎo)致了ELISA一步法檢測(cè)HBsAg假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)，而采用二步法則可以保證結(jié)果判讀無(wú)誤。
三、標(biāo)本溶血對(duì)乙肝表面抗原檢測(cè)影響的可能機(jī)制
溶血是由于各種原因造成紅細(xì)胞破壞，胞內(nèi)血紅蛋白(Hb)等物質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)液進(jìn)入血清。溶血對(duì)ELISA的影響主要是反應(yīng)孔對(duì)溶血血清中Hb的非特異性吸附和溶血時(shí)細(xì)胞內(nèi)液對(duì)血清的稀釋作用。單桂秋等[5]的實(shí)驗(yàn)也證明了溶血對(duì)血清具有稀釋作用。
在ELISA試驗(yàn)中，酶標(biāo)反應(yīng)板孔包被物的濃度是一個(gè)相對(duì)定值，抗原抗體反應(yīng)存在最適比例和后帶現(xiàn)象，因此，HBsAg濃度與A值只是在一定的范圍內(nèi)呈一定的線性關(guān)系;當(dāng)HBsAg達(dá)到一定濃度時(shí)A值的變化進(jìn)入平臺(tái)期;當(dāng)HBsAg濃度太高時(shí)，A值反而會(huì)降低。因此，溶血可以使HBsAg濃度很高的樣品的A值升高(在一定程度上解決了后帶現(xiàn)象);當(dāng)HBsAg濃度與A值呈線性關(guān)系時(shí)才會(huì)因溶血的稀釋作用使A值下降;當(dāng)HBsAg濃度近臨界值時(shí)，可能造成假陰性。
Hb具有類(lèi)過(guò)氧化物酶活性，其作用與辣根過(guò)氧化物酶類(lèi)似，如果反應(yīng)孔非特異吸附Hb而殘留，則可催化底物顯色，使本底A值升高甚至造成假陽(yáng)性。如果洗滌質(zhì)量好，則可能大大減少或排除非特異性吸附的干擾。單桂秋等[5]的實(shí)驗(yàn)未體現(xiàn)血中Hb非特異性吸附的影響。龍憲和等[8]采用二步法操作可以排除溶血釋出的Hb對(duì)HBsAg檢測(cè)的影響也說(shuō)明洗板質(zhì)量在ELISA檢測(cè)中的重要性。
總之，溶血對(duì)ELISA檢測(cè)HBsAg有一定的影響，影響的性質(zhì)及其大小因所使用的試劑、測(cè)定方法、標(biāo)本HBsAg的有無(wú)及濃度高低、洗板的質(zhì)量好壞而異。
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