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檢驗(yàn)技師考點(diǎn)：純化抗體
純化抗體通常用于直接檢測(cè)抗原。此時(shí)抗體標(biāo)記有一個(gè)易于鑒定的標(biāo)記物，用于結(jié)合和檢測(cè)所研究的抗原。在間接檢測(cè)抗原方法中，一抗不被標(biāo)記，而是用標(biāo)記的二抗(一種抗免疫球蛋白抗體)來(lái)檢測(cè)。一般而言，建議使用間接法。因?yàn)樵S多商家能夠提供可靠的標(biāo)記二抗，用間接法不僅省力，結(jié)果同樣可靠。 盡管如此，有幾種方法需要標(biāo)記的一級(jí)抗體。例如，在免疫染色試驗(yàn)中，需要研究2個(gè)或2個(gè)以上抗原的相對(duì)位置時(shí)，常需要純化抗體并用不同標(biāo)記物標(biāo)記，這樣能比較它們的相對(duì)位置。此時(shí)使用間接法不合適。因?yàn)殚g接法是用標(biāo)記二抗來(lái)給未標(biāo)記的一抗定位。又如，有時(shí)一抗需要標(biāo)記，而該樣本中又有大量無(wú)關(guān)抗體，它們能干擾對(duì)一抗的檢測(cè)，此時(shí)用間接法也不合適。用鼠源性單抗對(duì)鼠組織抗原進(jìn)行定位時(shí)，也會(huì)出現(xiàn)這種情況。此時(shí)需要純化一抗，并直接按下述方法進(jìn)行標(biāo)記。
簡(jiǎn)介：
制備高特異性、高效價(jià)的抗體是實(shí)驗(yàn)免疫學(xué)技術(shù)的基礎(chǔ)，抗體質(zhì)量的高低將直接影響試驗(yàn)的成敗。 通過(guò)不同方法制備的抗體往往與多種雜蛋白混雜在一起，為了獲得成分相對(duì)單一的抗體或?qū)⒖贵w用于特定的用途，就需要進(jìn)行抗體純化。從成分的角度分析, 抗體分子是一類(lèi)蛋白質(zhì)分子，與其他蛋白質(zhì)一樣，它有一定的等電點(diǎn)、溶解度、荷電性及疏水性，可以用電泳、 鹽析沉淀或其他層析技術(shù)進(jìn)行分離、 純化。
純化抗體通常用于直接檢測(cè)抗原。此時(shí)抗體標(biāo)記有一個(gè)易于鑒定的標(biāo)記物，用于結(jié)合和檢測(cè)所研究的抗原。在間接檢測(cè)抗原方法中，一抗不被標(biāo)記，而是用標(biāo)記的二抗(一種抗免疫球蛋白抗體)來(lái)檢測(cè)。一般而言，建議使用間接法。因?yàn)樵S多商家能夠提供可靠的標(biāo)記二抗，用間接法不僅省力，結(jié)果同樣可靠。 盡管如此，有幾種方法需要標(biāo)記的一級(jí)抗體。例如，在免疫染色試驗(yàn)中，需要研究2個(gè)或2個(gè)以上抗原的相對(duì)位置時(shí)，常需要純化抗體并用不同標(biāo)記物標(biāo)記，這樣能比較它們的相對(duì)位置。此時(shí)使用間接法不合適。因?yàn)殚g接法是用標(biāo)記二抗來(lái)給未標(biāo)記的一抗定位。又如，有時(shí)一抗需要標(biāo)記，而該樣本中又有大量無(wú)關(guān)抗體，它們能干擾對(duì)一抗的檢測(cè)，此時(shí)用間接法也不合適。用鼠源性單抗對(duì)鼠組織抗原進(jìn)行定位時(shí)，也會(huì)出現(xiàn)這種情況。此時(shí)需要純化一抗，并直接按下述方法進(jìn)行標(biāo)記。
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