檢驗技師考點：多克隆抗體的純化

　　多抗的純化是一件比較簡單的事情，因為人工干預比較大，所以對實驗者的操作依賴性較強。很多新手覺得這是一件比較復雜困難的工作，但是如果理解了原理，就可以自行改進實驗了。多抗純化方法比較多，過去有用鹽析法純化的，有用辛酸-硫酸銨沉淀的方式純化的，也有用冷酒精沉淀的方式純化的，也有后來的離子交換層析和Protein A，G，A/G純化的，但是在今天，市場上幾乎所有的抗體都是通過抗原親和純化得到的，與其它方法相比，抗原親和層析得到的抗體效率高、產(chǎn)量高、產(chǎn)品純、操作簡單。

　　操作方法：

　　免疫方法

　　可以采用以下各種方法之一進行免疫。

　　(1)淋巴結注射法：①在兔的兩后足跖部皮下(或皮內(nèi))注射活卡介苗 50mg(每側約0.30ml) 。7～10 天后，兔跖及腘肌淋巴結腫大;②于腫大的兩側淋巴結內(nèi)各注射加有完全佐劑的IgG 乳化抗原 0.50ml(含 IgG 5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、鏈霉素 1 000μg/ml);③必要時，14 天后，重復步驟②一次;④再過 7 天后，于兩側淋巴結內(nèi)各注射加有完全佐劑的 IgG 乳化抗原0.50ml(含IgG5mg/ml、青霉素 1 000U/ml、鏈霉素 1 000μg/ml) ;⑤5～7天后，耳靜脈采血。測定血清效價。

　　(2)皮下多點注射法：①家兔兩側掌(跖內(nèi)各注射含有完全佐劑抗原 0.10ml(IgG 含量5mg/ml) ;②7～10 天后，脊柱兩側多點(頸、胸、腰椎各兩點、共 6 點)皮下注射含不完全佐劑5的抗原，每點 0.50ml;③7～10 天后，脊柱兩側重復注射一次;④7～10 天后試血。不合格者重復步驟③。

　　(3)多途徑聯(lián)合注射法：①兩側掌(跖)內(nèi)側皮下注射含完全佐劑抗原 0.50ml(IgG 量為 5mg/ml) ;②14 天后，多點皮下注射含有不完全佐劑抗原;③7 天后，耳靜脈注射不含佐劑的抗原 2ml;④測定血清抗體效價，不合格者重復步驟③，并適當遞增 IgG 量。

　　效價測定

　　采用瓊脂擴散法。

　�、� 將血清倍比稀釋，加入外周孔。

　�、� 中間孔加動物 Ig。

　�、� 37℃濕盒瓊擴 24 小時，觀察結果。

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