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形態(tài)學(xué)檢查對(duì)細(xì)菌鑒定的導(dǎo)航作用
細(xì)菌鑒定的原則之一就是用最少的試驗(yàn)完成鑒定。細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查是最基本、簡(jiǎn)單、快速的常規(guī)鑒定方法。細(xì)菌形態(tài)學(xué)包括細(xì)菌細(xì)胞形態(tài)學(xué)和細(xì)菌菌落形態(tài)學(xué)。細(xì)菌形態(tài)學(xué)正確描述依賴(lài)于方法、培養(yǎng)基、培養(yǎng)時(shí)間、染色試劑等，培養(yǎng)基和培養(yǎng)時(shí)間不同會(huì)影響細(xì)菌的形態(tài)。下面是小編精心整理的形態(tài)學(xué)檢查對(duì)細(xì)菌鑒定的導(dǎo)航作用，歡迎大家分享。
形態(tài)學(xué)檢查對(duì)細(xì)菌鑒定的導(dǎo)航作用
1、菌落特征觀察
細(xì)菌在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)形成菌落。對(duì)菌落進(jìn)行描述應(yīng)包括菌落大小(分大、中、小，以1mm為界)、形狀、高度、邊緣、表面狀態(tài)、密度(透明度)、硬度(用接種環(huán)刮取菌落時(shí)的感覺(jué))、菌落內(nèi)部結(jié)構(gòu)、顏色、光澤以及與培養(yǎng)基表面的黏附程度，還應(yīng)包括菌落的溶血、氣味和色素產(chǎn)生情況等特性。觀察菌落特征的目的是為了對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步鑒定。有些特征是某些細(xì)菌所特有的，具有屬或種的鑒別價(jià)值，如肺炎鏈球菌在綿羊血瓊脂平板上的臍窩狀菌落(如圖1所示)、伴放線凝集桿菌菌落特殊的內(nèi)部結(jié)構(gòu)(如圖2所示)、侵蝕艾肯菌的斗笠樣菌落、斯氏假單胞菌皺紋樣菌落、變形桿菌遷徙樣菌落、銅綠假單胞菌的水溶性色素、紫色色桿菌的脂溶性色素(如圖3所示)、粘質(zhì)沙雷菌的紅色色素(如圖4所示)、產(chǎn)吲哚金黃桿菌產(chǎn)生的吲哚氣味、嗜血桿菌產(chǎn)生的鼠穴氣味、諾卡菌產(chǎn)生的腐土氣味、厭氧菌產(chǎn)生的腐氨氣味、熒光假單胞菌產(chǎn)生的黃色熒光素、某些厭氧菌可產(chǎn)生磚紅色熒光素等。有些細(xì)菌產(chǎn)生色素受到氣體的影響(粘質(zhì)沙雷菌在厭氧環(huán)境下不產(chǎn)色)，有些細(xì)菌產(chǎn)生色素受到光線的影響(某些快速生長(zhǎng)分枝桿菌是光產(chǎn)色或暗產(chǎn)色)。
對(duì)細(xì)菌菌落特征的觀察和描述是細(xì)菌鑒定的第一步驟，其主要目的體現(xiàn)在以下幾方面。
1.1 病原菌定量或半定量 在對(duì)標(biāo)本進(jìn)行定量或半定量接種后，通過(guò)菌落計(jì)數(shù)可獲得定量或半定量結(jié)果，細(xì)菌的定量在尿液分析和療效動(dòng)態(tài)觀察中具有臨床意義，半定量適用于開(kāi)放性標(biāo)本的結(jié)果分析(確定優(yōu)勢(shì)菌)。
1.2 確定病原菌 開(kāi)放性標(biāo)本受炎癥組織周?chē)つw、黏膜的常居菌叢污染的可能性較大，觀察培養(yǎng)結(jié)果時(shí)應(yīng)根據(jù)標(biāo)本直接涂片鏡檢結(jié)果，結(jié)合菌落形態(tài)特征來(lái)確定病原菌。
1.3 解釋血培養(yǎng)鏡檢結(jié)果 分析陽(yáng)性血培養(yǎng)瓶的轉(zhuǎn)種結(jié)果時(shí)，應(yīng)結(jié)合對(duì)陽(yáng)性培養(yǎng)液直接涂片的鏡檢結(jié)果，如果涂片結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果不符，應(yīng)考慮操作錯(cuò)誤或是污染所致。
1.4 確定鑒定方向 根據(jù)不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)特征，結(jié)合革蘭染色鏡檢結(jié)果及快速輔助試驗(yàn)(氧化酶、觸酶、凝固酶等)結(jié)果，可確定鑒定方向。
2、菌體形態(tài)觀察
革蘭染色細(xì)胞形態(tài)學(xué)是細(xì)菌分類(lèi)學(xué)的基礎(chǔ)，臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室仍然使用細(xì)胞形態(tài)學(xué)的方法進(jìn)行細(xì)菌鑒定，掌握細(xì)胞形態(tài)學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)方法能夠?yàn)闇?zhǔn)確鑒定細(xì)菌提供可靠保證。對(duì)細(xì)菌菌體形態(tài)特征的觀察和描述是細(xì)菌鑒定的第二步驟，其主要目的體現(xiàn)在以下幾方面。
2.1 解釋培養(yǎng)結(jié)果、確定鑒定方向 無(wú)論是液體培養(yǎng)(如血培養(yǎng)、標(biāo)本直接增菌培養(yǎng))或是固體培養(yǎng)(接種瓊脂平板)，都應(yīng)該將培養(yǎng)物進(jìn)行涂片、染色鏡檢確定培養(yǎng)物的性質(zhì)，即可快速報(bào)告，也是為下一步的鑒定指明方向。圖5所示為血培養(yǎng)陽(yáng)性培養(yǎng)物涂片革蘭染色鏡檢結(jié)果。
2.2 鑒別細(xì)菌的手段 細(xì)菌菌體形態(tài)結(jié)合菌落形態(tài)特征可對(duì)細(xì)菌進(jìn)行鑒別。例如，在選擇性巧克力平板(加萬(wàn)古霉素)上生長(zhǎng)的草綠色溶血菌落，是乳桿菌還是腸球菌(VRE)只要涂片鏡檢就很容易區(qū)分;鮑曼不動(dòng)桿與克雷白菌屬細(xì)菌的菌落形態(tài)相似，區(qū)別在于前者為革蘭陰性球桿菌(接近球菌)，后者為革蘭陰性桿菌;丹毒絲菌在血平板上的菌落形態(tài)與草綠色鏈球菌很相像，但鏡下形態(tài)差別很大。圖6所示為紅斑丹毒絲菌的革蘭染色鏡下形態(tài)。
2.3 鑒定方向及試劑選擇的依據(jù) 葡萄球菌和鏈球菌、革蘭陽(yáng)性球菌和革蘭陽(yáng)性桿菌、革蘭陰性球菌和革蘭陰性桿菌的鑒定方向均不同，鑒定試劑選擇也不同。
2.4 藥敏組合選擇的依據(jù) CLSI文件規(guī)定，每一種細(xì)菌都有一定的抗菌藥物組合供選擇。要準(zhǔn)確進(jìn)行藥敏組合選擇，就必須有準(zhǔn)確的細(xì)胞形態(tài)學(xué)結(jié)果作支持。
3、菌體特殊結(jié)構(gòu)的觀察
3.1 莢膜 莢膜是某些細(xì)菌在細(xì)胞壁外包裹的一層粘液性物質(zhì)，不同的細(xì)菌其莢膜成分也有一定差異，一般由多糖、多肽或蛋白質(zhì)組成。莢膜作為細(xì)菌的毒力因子有必要對(duì)其染色觀察，但莢膜染色對(duì)于臨床標(biāo)本分離菌株的鑒定價(jià)值并不大。圖7所示為大腸埃希菌莢膜染色結(jié)果。
3.2 鞭毛 觀察細(xì)菌鞭毛對(duì)于細(xì)菌鑒定具有重要的價(jià)值。依據(jù)鞭毛位置和數(shù)量，細(xì)菌分為單端極鞭毛菌、單端雙鞭毛菌、單端叢鞭毛菌、周鞭毛菌、側(cè)鞭毛菌。鞭毛是細(xì)菌的動(dòng)力器官，大多數(shù)情況下可用動(dòng)力試驗(yàn)驗(yàn)證細(xì)菌鞭毛的存在，但動(dòng)力試驗(yàn)無(wú)法代替鞭毛染色在細(xì)菌鑒定中的地位。圖8所示為霍亂弧菌鞭毛染色結(jié)果。
3.3 芽胞 芽胞的形態(tài)包括芽胞形狀、芽胞位置和孢子囊膨大。芽胞形態(tài)分為圓柱形、橢圓形、球形，芽胞位置分為端生、近端生、中生或近中生。根據(jù)芽胞的形態(tài)學(xué)可以進(jìn)行芽胞桿菌屬和梭菌屬的鑒定。芽胞染色并不優(yōu)于革蘭染色，使用相差顯微鏡觀察芽胞優(yōu)于芽胞染色和革蘭染色。圖9所示為艱難梭菌芽胞染色結(jié)果。
3.4 異染顆粒 其主要成分是多聚偏磷酸鹽，可隨菌齡的延長(zhǎng)而變大。多聚磷酸鹽顆粒對(duì)某些染料有特殊反應(yīng)，產(chǎn)生與所用染料不同的顏色，因而得名異染顆粒。如用甲苯胺藍(lán)、次甲基藍(lán)染色后不呈藍(lán)色而呈紫紅色。棒狀桿菌和某些芽胞桿菌常含有這種異染顆粒。白喉棒狀桿菌異染顆粒位于菌體兩端，故又稱(chēng)極體，有助于該菌的鑒定。圖10所示為白喉棒狀桿菌異染顆粒染色結(jié)果。
綜上所述, 臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)鑒定細(xì)菌離不開(kāi)形態(tài)學(xué)檢查,很難想象革蘭染色和形態(tài)學(xué)檢查錯(cuò)誤會(huì)得到正確的鑒定結(jié)果，形態(tài)學(xué)檢查對(duì)鑒定細(xì)菌起著“導(dǎo)航”作用，具有重要的價(jià)值，臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)工作者應(yīng)予重視。
細(xì)菌鑒定步驟
在實(shí)驗(yàn)室中，主要是根據(jù)所用的鑒定儀器特點(diǎn)、感染性疾病的類(lèi)型、標(biāo)本種類(lèi)、采集部位等因素建立具體的微生物學(xué)檢驗(yàn)程序。大致步驟如下。
1．獲得被鑒定菌種的純培養(yǎng)菌落。
2．確定染色（革蘭染色、抗酸染色）、形態(tài)和排列，按科、屬、種依次鑒定下去。
3．運(yùn)用知識(shí)、經(jīng)驗(yàn)、最小數(shù)量的試驗(yàn)方法做出鑒定。
細(xì)菌鑒定方法
1．生化鑒定
是細(xì)菌鑒定中最重要的一種，主要是借助細(xì)菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)分解能力的不同及其代謝產(chǎn)物的差異對(duì)細(xì)菌進(jìn)行鑒定，包括蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物試驗(yàn)、觸酶試驗(yàn)、糖分解產(chǎn)物試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)、凝固酶試驗(yàn)等。
2．血清學(xué)鑒定
適用于含較多血清型的細(xì)菌，常用方法是玻片凝集試驗(yàn)，并可用免疫熒光法、協(xié)同凝集試驗(yàn)、對(duì)流免疫電泳、間接血凝試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等方法快速、靈敏地檢測(cè)樣本中致病菌的特異性抗原。用已知抗體檢測(cè)未知抗原（待檢測(cè)的細(xì)菌），或用已知抗原檢測(cè)患者血清中的相應(yīng)抗細(xì)菌抗體及其效價(jià)。血清學(xué)鑒定操作簡(jiǎn)單快速，特異性高，可在生化鑒定基礎(chǔ)上為細(xì)菌鑒定提供確定診斷。
3．分子生物學(xué)檢測(cè)
適用于人工培養(yǎng)基不能生長(zhǎng)、生長(zhǎng)緩慢及營(yíng)養(yǎng)要求高不易培養(yǎng)的細(xì)菌，檢測(cè)方法包括核酸擴(kuò)增技術(shù)、核酸雜交、生物芯片及基因測(cè)序等。常見(jiàn)的核酸擴(kuò)增技術(shù)有聚合酶鏈反應(yīng)、連接酶鏈反應(yīng)等，主要用于耐甲氧西林、結(jié)核分枝桿菌等病原菌的檢測(cè)。核酸雜交有斑點(diǎn)雜交、原位雜交等，用于致病性大腸埃希菌、沙門(mén)菌、空腸彎曲菌等致病菌的檢測(cè)。生物芯片包括基因芯片和蛋白質(zhì)芯片，主要是對(duì)基因、蛋白質(zhì)、細(xì)胞及其他生物進(jìn)行大信息量分析的檢測(cè)技術(shù)。
4．微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)鑒定
可快速、準(zhǔn)確地對(duì)臨床近千種常見(jiàn)分離菌進(jìn)行鑒定，目前已在臨床實(shí)驗(yàn)室廣泛使用。其中，細(xì)菌16S rRNA編碼基因已成為較理想的基因分離靶序列，逐漸成為臨床細(xì)菌鑒定、分離的金標(biāo)準(zhǔn)。
5．質(zhì)譜技術(shù)
是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新型的軟電離生物質(zhì)譜，用于分析細(xì)菌的化學(xué)分類(lèi)和鑒定，具有高靈敏度和高質(zhì)量檢測(cè)范圍的優(yōu)點(diǎn)。主要是對(duì)核酸、蛋白質(zhì)、多肽等生物大分子串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行分析。
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