艾滋病的實驗室檢測流程

　　中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心繼發(fā)布《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范(2009 年版)》后，近日即將發(fā)布 2015 年版《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》，此規(guī)范堪稱艾滋病檢測實驗室的「紅寶書」，適用于疾病控制中心艾滋病確認(rèn)實驗室和醫(yī)療機(jī)構(gòu)的艾滋病初篩實驗室的 HIV 檢測技術(shù)操作。下面是小編為大家?guī)�來的艾滋病的實驗室檢測流程的知識，歡迎閱讀。

　　檢測項目的樣品種類

　　1 HIV 抗體檢測：全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液以及干血斑樣品。

　　2 HIV 抗原檢測：全血、血清、血漿、病毒培養(yǎng)上清液。

　　3 T 淋巴細(xì)胞亞群測定：EDTA 或肝素抗凝全血。

　　4 HIV-1 病毒載量、基因型、耐藥檢測：血漿、濾紙干血斑(DBS)。

　　5 HIV 核酸定性與定量、基因型檢測和 HIV-1 分離培養(yǎng)：淋巴細(xì)胞富集液、外周血單核淋巴細(xì)胞(PBMC)及全血。

　　當(dāng)然，實驗室最常用的仍然是血液標(biāo)本，其他只作為補(bǔ)充樣本。

　　HIV 抗體檢測

　　HIV 抗體檢測是艾滋病實驗室檢測的優(yōu)先選擇項目，在國內(nèi)絕大多數(shù)初篩實驗室應(yīng)用最廣泛。

　　1 初篩方法

　　(1)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)

　　ELISA 法檢測 HIV 抗體是 HIV 初篩實驗室最常用最普遍的方法，目前檢測試劑已經(jīng)發(fā)展到第四代，即同時檢測血液中 HIV-1P24 抗原和 HIV-1/2 抗體，秉承「寧可錯殺一千，不可漏網(wǎng)一個」的革命精神，其靈敏度遠(yuǎn)高于特異性，直叫 HIV 抗體無處遁形。

　　(2)化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(CIA/IFA)

　　這個試驗方法是近 10 年迅猛發(fā)展的一種新型檢測方法，其采用發(fā)光或熒光底物，既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體，用發(fā)光或熒光儀測定結(jié)果，其靈敏度較 ELISA 有了進(jìn)一步的提高，同時帶來的是檢測成本的增加和假陽性率的增高。

　　(3)快速檢測(RT)方法

　　此類方法操作簡便快速，適用于應(yīng)急檢測、門診急診檢測，但靈敏度和特異性遠(yuǎn)不如 ELISA 和發(fā)光法，但是經(jīng)濟(jì)實惠，也有一定的市場影響力。主要包括以下幾種方法：明膠顆粒凝集試驗(PA)、免疫滲濾試驗、免疫層析試驗。

　　2 確認(rèn)實驗

　　(1)免疫印跡試驗(WB)

　　WB 采用間接法檢測樣品中的抗 HIV-1/HIV-2 特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的 HIV-1 蛋白分離開來，經(jīng)過一系列處理后，硝酸纖維素膜顯示與特異抗原的結(jié)合的抗體條帶，從而確診抗體的存在。

　　(2)條帶/線性免疫試驗(RIBA/LIA)

　　實驗原理基本同 WB 法，不再贅述。

　　HIV-1 抗原檢測

　　1 篩查實驗

　　(1)酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA 法)：即第四代抗原抗體聯(lián)合檢測試劑盒。抗體包被固相反應(yīng)孔(管)的底部，待測樣本中 P24 抗原與包被抗體形成抗原抗體復(fù)合物，再加入酶(HRP)標(biāo)記的 HIV-1 抗體與抗原結(jié)合，加底物顯色，在酶標(biāo)儀上讀取結(jié)果。因同時檢測抗原抗體，靈敏度大大提高，有效縮短了 HIV 感染的檢測窗口期，但因試劑成本較高，在普通篩查實驗室推廣有一定難度。

　　(2)酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)：待測樣品的 p24 抗原與包被在固相孔(管)內(nèi)的 p24 抗體結(jié)合，并被生物素標(biāo)記的 p24 抗體識別。臨床實驗室應(yīng)用前景不明朗，需要熒光檢測設(shè)備，成本較高。

　　(3)電化學(xué)發(fā)光法(ECLIA)：待測樣品的 p24 抗原與包被抗體的磁性微粒和發(fā)光劑標(biāo)記的抗體在反應(yīng)管中溫育，形成磁性微珠包被抗體-抗原-發(fā)光劑標(biāo)記抗體復(fù)合物。

　　(4)抗原抗體快速檢測法：同快速方法(RT)檢測抗體，不同之處是用 HIV 抗體包被載體，檢測靈敏度同樣較差。

　　2 中和試驗

　　中和試驗主要是 p24 抗原檢測的補(bǔ)充試驗，還可做 HIV-1RNA 的定性或定量檢測，以排除篩查試驗的假陽性。

　　(1)酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA 法)：待檢樣品先與中和劑(p24 抗原的抗體)共同孵育，如果樣品中存在 p24 抗原，中和抗體將與之結(jié)合形成復(fù)合物，而不能與固相載體上的捕獲抗體結(jié)合。

　　(2)酶聯(lián)熒光分析法(ELFA)：原理和檢測步驟同上述酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA 法)，中和率 ≥ 60 %，認(rèn)為樣品中的 p24 抗原是真陽性。

　　(3)電化學(xué)發(fā)光法 (ECLIA)：原理和檢測步驟同上述酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA 法)，中和率大于 50%，認(rèn)為樣品中的 p24 抗原是真陽性。

　　HIV 核酸檢測

　　目前國內(nèi) HIV 核酸檢測試劑主要為 Taqman 實時熒光 PCR 檢測試劑，可檢測血漿、血清、組織器官或血液制品的 HIV-1RNA 和 DNA，DBS 可用于檢測 RNA/DNA。全球目前正式用于臨床診斷 HIV-1 急性期感染的核酸檢測試劑比較少，主要是美國 FDA 批準(zhǔn)的 Gen-Probe 公司生產(chǎn)的 Aptima HIV-1 RNA 核酸定性檢測試劑和歐盟批準(zhǔn)的 Abbott M2000 HIV-1 RNA/DNA 定性檢測試劑。

　　臨床診斷相關(guān)的檢測策略及結(jié)果報告

　　HIV 檢測陽性結(jié)果的檢測過程一般經(jīng)歷兩個階段，初篩和復(fù)檢程序。以 HIV 抗體檢測為例，具體流程如下：

　　試劑 1 進(jìn)行初篩，結(jié)果無反應(yīng)，報告「HIV 抗體陰性」;結(jié)果有反應(yīng)，不能出具陽性報告，必須進(jìn)入復(fù)檢試驗。對初篩有反應(yīng)的樣品，用原有試劑雙份或雙孔進(jìn)行復(fù)檢試驗(或者兩種試劑復(fù)檢)，如均無反應(yīng)，報告「HIV 抗體陰性」;如均有反應(yīng)或一個有反應(yīng)一個無反應(yīng)，進(jìn)行補(bǔ)充試驗(抗體確證試驗和 HIV-1 核酸試驗)，報告 HIV 感染待確定。

　　目前大部分臨床實驗室為艾滋病初篩實驗室，開展常規(guī)初篩實驗，發(fā)現(xiàn)陽性結(jié)果初步復(fù)檢后送省市 CDC 或當(dāng)?shù)仄渌�確認(rèn)實驗室做確認(rèn)實驗。

　　目前國內(nèi)實驗室多采用「初篩抗體+WB 法確認(rèn)」等兩步法進(jìn)行 HIV 檢測及確診，并嚴(yán)格進(jìn)行人員、儀器、方法學(xué)質(zhì)量控制，建立了遍布全國的臨床醫(yī)療機(jī)構(gòu)的初篩實驗室及省市 CDC 的確認(rèn)實驗室，基本滿足了日益增長的艾滋病病人的檢測及病情的變化的監(jiān)測。

　　艾滋病基本常識

　　1、艾滋病的由來

　　艾滋病即獲得性免疫缺陷綜合癥(AcquiredImmunodeficiencySyndrome AIDS)是人類免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirusHIV)破壞感染者免疫系統(tǒng),逐漸導(dǎo)致免疫功能衰竭,最終感染者會死于任何一種(即使對正常人來說是微不足道的)感染、惡性腫瘤、神經(jīng)系統(tǒng)病變;所以,預(yù)防、治療、控制感染是每一個艾滋病感染者都在關(guān)心的問題。

　　2、艾滋病的癥狀

　　HIV相關(guān)癥狀:主要表現(xiàn)為持續(xù)一個月以上的發(fā)熱、盜汗、腹瀉;體重減輕10%以上。部分病人表現(xiàn)為神經(jīng)精神癥狀,如記憶力減退、精神淡漠、性格改變、頭痛、癲癇及癡呆等。另外還可出現(xiàn)持續(xù)性全身性淋巴結(jié)腫大,其特點為除腹股溝以外有兩個或兩個以上部位的淋巴結(jié)腫大;淋巴結(jié)直徑≥1cm,無壓痛,無粘連;持續(xù)時間3個月以上。

　　3、艾滋病的相關(guān)機(jī)會性感染癥狀

　　HIV相關(guān)機(jī)會性感染及腫瘤的常見癥狀:發(fā)熱、盜汗、淋巴結(jié)腫大、咳嗽咳痰咯血、呼吸困難、頭痛、嘔吐、腹痛腹瀉、消化道出血、吞咽困難、食欲下降、口腔白斑及潰瘍、各種皮疹、視力下降、失明、癡呆、癲癇、肢體癱瘓、消瘦、貧血、二便失禁、尿儲留、腸梗阻等。

　　如何進(jìn)行自我檢測艾滋病

　　首先要看自己是否有如下高危行為：性生活比較復(fù)雜、男同性戀者、吸毒或是與他人混用注射器、曾被感染有艾滋病毒的針頭或是血制品感染史、母親為艾滋病患者等。

　　如有高危行為者，若是出現(xiàn)以下兩種或兩種以上情況，要引起高度警覺：近期體重驟降10%以上、慢性腹瀉或咳嗽長達(dá)一個月以上、持續(xù)或間歇發(fā)熱達(dá)一個月以上、全身可觸及有淋巴結(jié)腫大、反復(fù)出現(xiàn)帶狀皰疹或是慢性播散性單純皰疹感染、口咽部有念珠菌感染。

　　抽血進(jìn)行常規(guī)檢查，有不同程度的貧血，同時白細(xì)胞計數(shù)減少提示有病毒感染。尿常規(guī)可見尿蛋白。

　　去醫(yī)院進(jìn)行HIV—1抗體的檢測，ELISA測定法結(jié)果連續(xù)兩次為陽性者，再行WB法進(jìn)行確診。

　　從血液、單個核細(xì)胞及腦脊液中如果能夠分離出人免疫缺陷病毒者，可以作為判定感染艾滋病。

　　得了艾滋病怎么辦

　　如果有不潔的性行為或者有過吸毒行為，那么過了三個月的窗口期，就應(yīng)該去醫(yī)院進(jìn)行艾滋病篩查。如果醫(yī)院的篩查結(jié)果是HIV抗體陽性，那么還需要去疾控中心做最后確診，如果疾控中心報告結(jié)果仍然是陽性，那么就確診了，您確實感染了HIV病毒。

　　經(jīng)過篩查確診HIV病毒感染者后，最忌諱的就是恐慌和自暴自棄，應(yīng)該第一時間調(diào)整心態(tài)，放棄悲觀的灰色的心情和想法，積極的接受疾控中心的治療。當(dāng)然，目前世界針對艾滋病的治療除了控制病毒的復(fù)制，一般還沒有有效殺滅病毒的方法�？鼓孓D(zhuǎn)錄是對抗艾滋病較為有效的方法。而且，疾控中心是免費發(fā)放抗病毒藥物的，關(guān)鍵是在發(fā)現(xiàn)早起就開始吃藥。

　　科學(xué)的用藥的同時還要調(diào)整心態(tài)，如果抑郁，悲觀，那么打敗你的不是病毒，而是你自己。是你自己低頭放棄了希望。調(diào)整好心態(tài)，平和的面對現(xiàn)實，才能讓我們的身體迸發(fā)活力，更加積極的對抗病毒的侵蝕。所以一個健康的心態(tài)是對抗艾滋病最有效的手段和途徑。

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