公衛(wèi)執(zhí)業(yè)醫(yī)師《醫(yī)學(xué)微生物學(xué)》弧菌屬知識(shí)

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2017年公衛(wèi)執(zhí)業(yè)醫(yī)師《醫(yī)學(xué)微生物學(xué)》弧菌屬知識(shí)

　　弧菌屬(Vibrio)細(xì)菌是一大群菌體短小，彎曲成弧形的革蘭陰性菌，本菌屬與腸桿菌科的主要不同點(diǎn)是氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性(麥契尼可夫弧菌除外)和有一根位于菌體一端的單鞭毛。弧菌屬是公衛(wèi)執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試醫(yī)學(xué)微生物學(xué)的知識(shí)點(diǎn)。下面是yjbys小編為大家?guī)淼年P(guān)于弧菌屬的知識(shí)，歡迎閱讀。

2017年公衛(wèi)執(zhí)業(yè)醫(yī)師《醫(yī)學(xué)微生物學(xué)》弧菌屬知識(shí)

　　第一節(jié) 霍亂弧菌

　　霍亂弧菌(V.cholerae)是引起烈性傳染病霍亂的病原體，二千多年前已有記載。自1817年以來，已發(fā)生過7次世界性霍亂大流行，前6次均由霍亂弧菌古典生物型引起，1961年開始的第7次大流行由霍亂弧菌El Tor生物型引起。1992年一個(gè)新的流行株O139(Bengal)在沿孟加拉彎的印度和孟加拉一些城市出現(xiàn)，并很快傳遍亞洲，這是首次由非O1群霍亂弧菌引起的流行。

　　一、生物學(xué)性狀

　　形態(tài)與染色霍亂弧菌菌體大小為0.5～0.8´1.5~3mm。從病人新分離出的細(xì)菌形態(tài)典型，呈弧型或逗點(diǎn)狀(圖10-1)。但經(jīng)人工培養(yǎng)后，細(xì)菌常呈桿狀而不易與腸道桿菌區(qū)別。革蘭染色陰性。特殊結(jié)構(gòu)有菌毛，無(wú)芽胞，有些菌株(包括O139)有莢膜，在菌體一端有一根單鞭毛。若取病人米泔水樣糞便或培養(yǎng)物作懸滴觀察，細(xì)菌運(yùn)動(dòng)非�；顫姡蚀┧髽踊蛄餍菭�。

　　培養(yǎng)特性與生化反應(yīng) 兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高。生長(zhǎng)繁殖的溫度范圍廣(18~37°)，故可在外環(huán)境中生存。耐堿不耐酸，在pH8.8~9.0的堿性蛋白胨水或堿性瓊脂平板上生長(zhǎng)良好，因其它細(xì)菌在此pH中不易生長(zhǎng)，故初次分離霍亂弧菌常用堿性蛋白胨水增菌�；魜y弧菌可在無(wú)鹽環(huán)境中生長(zhǎng)，而其它致病性弧菌則不能�；魜y弧菌為過氧化氫酶陽(yáng)性，氧化酶陽(yáng)性，能發(fā)酵很多常見的單糖、雙糖和醇糖，如葡萄糖、蔗糖和甘露醇，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣;不分解阿拉伯膠糖;能還原硝酸鹽，吲哚反應(yīng)陽(yáng)性。

　　抗原構(gòu)造與分型霍亂弧菌有耐熱的0抗原和不耐熱的H抗原。根據(jù)0抗原不同，現(xiàn)已有155個(gè)血清群，其中O1群、O139群引起霍亂，其余的血清群分布于地面水中，可引起人類胃腸炎等疾病，但從未引起霍亂的流行。H抗原無(wú)特異性，免疫擴(kuò)散試驗(yàn)表明所有霍亂弧菌擁有相同的H抗原。

　　O1群霍亂弧菌根據(jù)其菌體抗原由3種抗原因子A、B、C組成，又可分為3個(gè)血清型：小川型(Ogawa)、稻葉型( Inaba)、和彥島型(Hikojima)(表10-1)。

　　表10-1 霍亂弧菌O1群血清型

#FormatImgID_0# 血清型（抗原組分）	O1多克隆抗體	O1單克隆抗體 A B C			出現(xiàn)頻率	造成流行
小川型（AB）	+	+	+	-	常見	是
稻葉型（AC）	+	+	-	+	常見	是
彥島型（ABC）	+	+	+	+	極少見	未知

　　“+” 凝集; “-”不凝集

　　根據(jù)表型差異，O1群霍亂弧菌的每一個(gè)血清型還可分為2個(gè)生物型，即古典生物型(classical biotype)和El Tor生物型(El Tor biotype)因在埃及西奈半島El Tor檢疫站首次分離出而命名)。古典生物型不溶解羊紅細(xì)胞，不凝集雞紅細(xì)胞，對(duì)50IU的多粘菌素敏感，可被第IV群噬菌體裂解，而El Tor弧菌則完全相反。

　　O139群在抗原性方面與O1群之間無(wú)交叉，序列分析發(fā)現(xiàn)O139群失去了O1群的0抗原基因，出現(xiàn)了一個(gè)約36 kb的新基因，編碼與O1群不同的脂多糖抗原和莢膜多糖抗原，但與O22和O155等群可產(chǎn)生抗原性交叉。在遺傳性方面，如核糖型，限制性酶切電泳圖譜，外膜蛋白，毒性基因等則與O1群的古典型和El Tor生物型的流行株相似。

　　抵抗力 El Tor生物型和其它非01群霍亂弧菌在外環(huán)境中的生存力較古典型為強(qiáng)，在河水、井水及海水中可存活1~3周，有時(shí)還可越冬。本菌不耐酸，在正常胃酸中僅能存活4分鐘。55°C濕熱15分鐘，100°C煮沸1~2分鐘，0.5ppm氯15分鐘能殺死霍亂弧菌。以1：4比例加漂白粉處理病人排泄物或嘔吐物,經(jīng)1小時(shí)可達(dá)到消毒目的。

　　二、致病性

　　致病物質(zhì) 霍亂弧菌的致病物質(zhì)涉及到染色體上多個(gè)基因，它們主要包括由ToxR蛋白調(diào)控的ctxA、ctxB、tcp、zot、ace等基因，另外還有二個(gè)不受ToxR蛋白調(diào)控的毒力因子基因hlyA和hap。

　　1.霍亂腸毒素是目前已知的致瀉毒素中最為強(qiáng)烈的毒素，是腸毒素的典型代表。由一個(gè)A亞單位(分子量為27.2kDa)和5個(gè)相同的B亞單位(每個(gè)亞單位分子量為11.7kDa)構(gòu)成的一個(gè)熱不穩(wěn)定性多聚體蛋白，分別由結(jié)構(gòu)基因ctx(cholera toxin)A和ctxB編碼。ctxAB操縱子位于染色體上稱作核心區(qū)的部位，核心區(qū)的兩端為重復(fù)序列(RS1)�；魜y弧菌古典生物型染色體上廣泛散布著以2拷貝ctx為一組的CTX單元，。El Tor生物型染色體上CTX則為多拷貝隨機(jī)分布。B亞單位可與小腸粘膜上皮細(xì)胞GM1神經(jīng)節(jié)苷脂受體結(jié)合，介導(dǎo)A亞單位進(jìn)入細(xì)胞，A亞單位在發(fā)揮毒性作用前需經(jīng)蛋白酶作用裂解為A1和A2兩條多肽。A1作為腺苷二磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶可使NAD(輔酶I)上的腺苷二磷酸核糖轉(zhuǎn)移到G蛋白上，稱GS，GS的活化可使細(xì)胞內(nèi)cAMP水平升高，主動(dòng)分泌Na+、K+、HCO3—和水，導(dǎo)致嚴(yán)重的腹瀉與嘔吐。

　　此外，在ctx操縱子上游還存在兩個(gè)編碼毒性相關(guān)的zot (zonula occludens toxin ，小帶聯(lián)結(jié)毒素) 、ace (accessory cholera enterotoxin)基因。在實(shí)驗(yàn)兔中，其編碼產(chǎn)物Zot能增加腸粘膜的通透性;Ace使結(jié)扎的回腸段中液體聚積。志愿者口服ctxAB缺失的基因工程變異株產(chǎn)生的輕度腹瀉可能與這二個(gè)毒性基因有關(guān)。

　　2.鞭毛、菌毛及其它毒力因子霍亂弧菌活潑的鞭毛運(yùn)動(dòng)有助于細(xì)菌穿過腸粘膜表面粘液層而接近腸壁上皮細(xì)胞。細(xì)菌的普通菌毛是細(xì)菌定居于小腸所必須的因子。只有粘附定居后方可致病。與此相關(guān)基因有acf和 tcpA。acf (accessory colonization factor) 編碼粘附素; tcpA (toxin coregulated pilus A) 編碼菌毛蛋白中一個(gè)分子量為20.5kDa的重要亞單位。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)使tcp失活后，變異株即失去定居功能和致瀉特性。其他毒力因子還有hlyA(hemolytic-cytolytic A)基因編碼的具有溶血-溶細(xì)胞的蛋白;hap(hemagglutinin/protease)基因編碼的有助于細(xì)菌從死亡細(xì)胞上解離的血凝素/蛋白酶。

　　O139群除具有上述O1群的致病物質(zhì)和相關(guān)基因外，還存在多糖莢膜和特殊LPS毒性決定簇，其功能是抵抗血清中殺菌物質(zhì)和能粘附到小腸粘膜上，不表達(dá)LPS決定簇和莢膜的TnphoA突變株則對(duì)血清易感。

　　所致疾病引起烈性腸道傳染病霍亂，為我國(guó)的甲類法定傳染病。在自然情況下，人類是霍亂弧菌的唯一易感者。在地方性流行區(qū)，除病人外，無(wú)癥狀感染者也是重要傳染源。傳播途徑主要是通過污染的水源或食物經(jīng)口攝入，人與人之間的直接傳播不常見。在正常胃酸條件下，需要進(jìn)入大量的細(xì)菌(108 )方能引起感染，但當(dāng)胃酸低時(shí)，感染劑量可減少到103~105個(gè)細(xì)菌。病菌到達(dá)小腸后，粘附于腸粘膜表面并迅速繁殖，不侵入腸上皮細(xì)胞和腸腺，細(xì)菌在繁殖過程中產(chǎn)生腸毒素而致病。O1群霍亂弧菌感染可從無(wú)癥狀或輕型腹瀉到嚴(yán)重的致死性腹瀉，霍亂弧菌古典生物型所致疾病較El tor生物型嚴(yán)重。典型病例一般在吞食細(xì)菌后2~3天突然出現(xiàn)劇烈腹瀉和嘔吐，在疾病最嚴(yán)重時(shí)，每小時(shí)失水量可高達(dá)1升，排出如米泔水樣腹瀉物。由于大量水分和電解質(zhì)喪失而導(dǎo)致失水，代謝性酸中毒，低堿血癥和低容量性休克及心力不齊和腎衰竭，如未經(jīng)治療處理，病人死亡率高達(dá)60%，但若及時(shí)給病人補(bǔ)充液體及電解質(zhì)，死亡率可小于1%。O139群霍亂弧菌感染比O1群嚴(yán)重，表現(xiàn)為嚴(yán)重脫水和高死亡率，又成人病例所占比例較高〈70%，而O1群霍亂弧菌流行高峰期，兒童病例約占60%。

　　病愈后一些患者可短期帶菌，一般不超過2周，個(gè)別El Tor型病例病后可帶菌長(zhǎng)達(dá)數(shù)月或數(shù)年之久。病菌主要存在于膽囊中。

　　三、免疫性

　　對(duì)O1群霍亂弧菌感染的研究和歷次霍亂流行的觀察，表明感染霍亂弧菌后，機(jī)體可獲得牢固免疫力，再感染少見。病人發(fā)病數(shù)月后，血液中和腸腔中可出現(xiàn)保護(hù)性的抗腸毒素抗體及抗菌抗體，抗腸毒素抗體主要針對(duì)霍亂毒素B亞單位，抗菌抗體主要針對(duì)O抗原。腸腔中的sIgA可凝集粘膜表面的病菌，使其失去動(dòng)力;可與菌毛等粘附因子結(jié)合，阻止霍亂弧菌粘附至腸粘膜上皮細(xì)胞;可與霍亂腸毒素B亞單位結(jié)合，阻斷腸毒素與小腸上皮細(xì)胞受體作用。霍亂弧菌引起的腸道局部粘膜免疫是霍亂保護(hù)性免疫的基礎(chǔ)。

　　感染O139群的病人大多為成年人，表明以前感染O1群獲得的免疫對(duì)O139群感染無(wú)交叉保護(hù)作用。O139群感染后的`免疫應(yīng)答與O1群基本一致。家兔腸道結(jié)扎實(shí)驗(yàn)和小鼠攻擊實(shí)驗(yàn)證明，O139群的保護(hù)性免疫以針對(duì)脂多糖和莢膜多糖的抗菌免疫為主，抗毒素免疫為輔。O1群的脂多糖O抗原與O139群存在顯著差異，且還缺少莢膜多糖表面抗原，故其引起的免疫不能交叉保護(hù)O139群的感染。

　　四、微生物學(xué)檢查法

　　霍亂是烈性傳染病，對(duì)首例病人的病原學(xué)診斷應(yīng)快速、準(zhǔn)確，并及時(shí)作出疫情報(bào)告。

　　標(biāo)本病人糞便，肛拭;流行病學(xué)調(diào)查還包括水樣。霍亂弧菌不耐酸和干燥。為避免因糞便發(fā)酵產(chǎn)酸而使病菌滅活，標(biāo)本應(yīng)及時(shí)培養(yǎng)或放入Cary-Blair保存液中運(yùn)輸;腸道病原菌常用的甘油鹽水緩沖保存液不適宜。

　　直接鏡檢革蘭染色陰性弧菌，懸滴法觀察細(xì)菌呈穿梭樣運(yùn)動(dòng)有助于診斷。

　　分離培養(yǎng) 常將標(biāo)本首先接種至堿性蛋白胨水增菌，37°C孵育6-8小時(shí)后直接鏡檢并作分離培養(yǎng)。目前常用的選擇培養(yǎng)基為TCBS，該培養(yǎng)基含有硫代硫酸鹽、枸櫞酸鹽、膽鹽及蔗糖，霍亂弧菌因分解蔗糖呈黃色菌落。挑選可疑菌落進(jìn)行生化反應(yīng)及與O1群多價(jià)和單價(jià)血清作玻片凝集反應(yīng)。目前還需與O139群抗血清做凝集反應(yīng)。其它分離培養(yǎng)基還有堿性平板、血平板和TTGA培養(yǎng)基等。

　　五、防治原則

　　改善社區(qū)環(huán)境，加強(qiáng)水源管理;培養(yǎng)良好個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣，不生食貝殼類海產(chǎn)品等是預(yù)防霍亂弧菌感染和流行的重要措施。

　　疫苗預(yù)防長(zhǎng)期以來使用O1群霍亂弧菌死菌苗肌肉注射，雖可增強(qiáng)人群的特異性免疫力，但保護(hù)力僅為50%左右，且血清抗體持續(xù)時(shí)間較短，僅為3~6個(gè)月。在認(rèn)識(shí)到腸道局部免疫對(duì)霍亂預(yù)防起主要作用后，目前霍亂疫苗預(yù)防的重點(diǎn)已轉(zhuǎn)至研制口服菌苗的方向上，包括B亞單位-全菌滅活口服疫苗、基因工程減毒活菌苗(用基因工程技術(shù)去除O1群霍亂弧菌野生株DNA中大部分毒力基因的活疫苗)、帶有霍亂弧菌幾個(gè)主要保護(hù)性抗原的基因工程疫苗等。其中前兩種疫苗已進(jìn)行過大規(guī)模人群試驗(yàn)，對(duì)其有效保護(hù)率和保護(hù)時(shí)間正在進(jìn)行評(píng)估，且在某些國(guó)家已獲準(zhǔn)使用。0139尚無(wú)預(yù)防性疫苗，候選菌苗正在研制中，思路是制成包括預(yù)防O1群和O139群霍亂弧菌感染的二價(jià)菌苗。

　　及時(shí)補(bǔ)充液體和電解質(zhì)，預(yù)防大量失水導(dǎo)致的低血容量性休克和酸中毒是治療霍亂的關(guān)鍵;抗生素的使用可減少外毒素的產(chǎn)生，加速細(xì)菌的清除，用于霍亂的抗菌藥物有四環(huán)素、強(qiáng)力霉素、呋喃唑酮、氯霉素和復(fù)方SMZ-TMP等。但帶有多重耐藥質(zhì)粒的菌株在增加;且O139群的耐藥性強(qiáng)于O1群，給治療帶來一定困難。

　　第二節(jié) 副溶血性弧菌

　　副溶血性弧菌(V。parahemolyticus)于1950年從日本一次暴發(fā)性食物中毒中分離發(fā)現(xiàn)。該菌存在于近海的海水、海底沉積物和魚類、貝殼等海產(chǎn)品中。根據(jù)菌體O抗原不同，現(xiàn)已有13個(gè)血清群。主要引起食物中毒，尤以日本、東南亞、美國(guó)及我國(guó)臺(tái)北地區(qū)多見，也是我國(guó)大陸沿海地區(qū)食物中毒中最常見的一種病原菌。

　　生物學(xué)特性同其它引起人類感染的弧菌種類一樣，該菌與霍亂弧菌的一個(gè)顯著差別是嗜鹽(halophilic)，在培養(yǎng)基中以含3.5%NaCl最為適宜，無(wú)鹽則不能生長(zhǎng)，但當(dāng)NaCl濃度高于 8%時(shí)也不能生長(zhǎng)。在鹽濃度不適宜的培養(yǎng)基中，細(xì)菌呈長(zhǎng)桿狀或球桿狀等多形態(tài)。不耐熱，90°C1分鐘即被殺死;不耐酸，1%醋酸或50%食醋中1分鐘死亡。

　　副溶血性弧菌在普通血平板(含羊、兔或馬等血液)上不溶血或只產(chǎn)生a溶血。但在特定條件下，某些菌株在含高鹽(7%)的、人O型血或兔血及以D-甘露醇作為炭源的我妻(Wagatsuma)瓊脂平板上可產(chǎn)生b溶血，稱為神奈川現(xiàn)象(Kanagawa phenomenon,KP)。日本學(xué)者檢測(cè)了3370株副溶血性弧菌，來自病人的菌株中96.5%為KP+，而來自海產(chǎn)品及海水的菌株僅1%陽(yáng)性。

　　致病性引起食物中毒的.確切致病機(jī)制尚待闡明。KP+菌株為致病性菌株基本肯定�，F(xiàn)已從KP+菌株分離出二種致病因子，其一為耐熱直接溶血素(thermostable direct hemolysin ,TDH),動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明具有細(xì)胞毒和心臟毒兩種作用。其基因?yàn)殡p拷貝(tdh1和tdh2)，KP實(shí)驗(yàn)中的溶血現(xiàn)象即由tdh2位點(diǎn)決定。最近的研究還表明，tdh基因家族也廣泛存在于人類致病性弧菌中，如大多數(shù)霍利斯弧菌菌株(V.hollisae)，某些擬態(tài)弧菌菌株(V.mimicus)中有tdh基因，非O1群霍亂弧菌中也存在同源性約為93%~96%的tdh相關(guān)基因，提示該基因與致病關(guān)系密切。另一個(gè)致病因子為耐熱相關(guān)溶血素( thermostable related hemolysin TRH)生物學(xué)功能與TDH相似，其基因與 tdh同源性為68%。

　　其它致病物質(zhì)可能還包括粘附素和粘液素酶。

　　該菌引起的食物中毒經(jīng)烹飪不當(dāng)?shù)暮．a(chǎn)品或鹽腌制品所傳播。常見的為海蟄、海魚、海蝦及各種貝類，因食物容器或砧板生熟不分污染本菌后，也可發(fā)生食物中毒。該病常年均可發(fā)生，潛伏期5~72小時(shí)，平均24小時(shí)，可從自限性腹瀉至中度霍亂樣病癥，有腹痛、腹瀉、嘔吐和低熱，糞便多為水樣，少數(shù)為血水樣，恢復(fù)較快，病后免疫力不強(qiáng)，可重復(fù)感染。

　　該菌還可引起淺表創(chuàng)傷感染、敗血癥等。

　　診斷與防治

　　標(biāo)本采取患者糞便、肛拭或剩余食物，直接分離培養(yǎng)于SS瓊脂平板或嗜鹽菌選擇平板。如出現(xiàn)可疑菌落，進(jìn)一步作嗜鹽性試驗(yàn)與生化反應(yīng)，最后用診斷血清進(jìn)行鑒定。最近已發(fā)展了基因探針雜交及PCR快速診斷法，可直接從原始食物標(biāo)本或腹瀉標(biāo)本中檢測(cè)耐熱毒素基因。

　　治療可用抗菌藥物，如慶大霉素或復(fù)方SMZ -TMP，嚴(yán)重病例需輸液和補(bǔ)充電解質(zhì)。

　　例題：

　　1.細(xì)菌性痢疾的病原體屬于

　　A、志賀菌屬

　　B、沙門菌屬

　　C、弧菌屬

　　D、彎曲菌屬

　　E、螺旋菌屬

　　2.細(xì)菌性痢疾散發(fā)流行的主要途徑是

　　A、集體食堂食物被污染造成經(jīng)口感染

　　B、井水、池塘或供水系統(tǒng)被污染造成經(jīng)口感染

　　C、健康人的手或蔬菜、瓜果等食物被污染造成經(jīng)口感染