畢業(yè)論文：檢測乙肝病毒標(biāo)志物的效果

　　【摘要】 目的 對比化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法（CLEIA）與酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測乙型肝炎（乙肝）病毒標(biāo)志物的效果。方法 200例疑似乙型肝炎患者， 空腹靜脈采血， 分離血清。對200份血清分別進(jìn)行化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測5種乙肝病毒標(biāo)志物， 比較兩種方法乙肝病毒標(biāo)志物檢出率及靈敏度。結(jié)果 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法對乙肝表面抗原（HBsAg）及乙肝e抗體（HBeAb）的檢出率明顯高于酶聯(lián)免疫吸附法， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；但兩種方法對乙肝病毒e抗原（hbeag）、 p="">0.05）。化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法的檢測靈敏度高于酶聯(lián)免疫吸附法。結(jié)論 相比于酶聯(lián)免疫吸附法， 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法靈敏度高， 特異性強(qiáng)， 用于乙肝病毒標(biāo)志物的檢測準(zhǔn)確率高。

　　【關(guān)鍵詞】 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法；酶聯(lián)免疫吸附法；乙型肝炎病毒標(biāo)志物；效果

　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.01.011

　　我國是乙肝病毒感染疫情嚴(yán)重的國家， 我國人口中約有1/10為乙肝病毒攜帶者1]。乙肝病毒標(biāo)志物是檢測乙肝病毒感染的直接證據(jù)， 同時， 可通過監(jiān)測乙肝病毒標(biāo)志物觀察患者病情、評價(jià)藥物治療效果。目前， 臨床常用的乙肝病毒標(biāo)志物監(jiān)測的方法為酶聯(lián)免疫吸附法， 隨著化學(xué)發(fā)光酶免疫分析技術(shù)的不斷發(fā)展， 其在檢測上的應(yīng)用也逐漸為人們所重視， 且在乙肝病毒標(biāo)志物的檢測中應(yīng)用效果良好。

　　1 資料與方法

　　1. 1 一般資料 選取本院傳染科2013年1月～2014年1月門診疑似乙型肝炎患者200例作為本次的研究對象。其中， 男108例， 女92例， 年齡19～68歲， 平均年齡（38.1±12.8）歲， 患者經(jīng)基礎(chǔ)檢查， 無其他傳染性疾病及肝臟器質(zhì)性病變。

　　1. 2 方法 所有患者均空腹采用靜脈采血方式， 抽取適量血液。室溫下離心分離15 min， 分離血清以備檢測。

　　1. 2. 1 儀器及試劑選擇 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法選擇實(shí)驗(yàn)儀器為鄭州安圖生物工程有限公司生產(chǎn)的LUMO半自動分析儀， 乙肝病毒標(biāo)志物定量檢測試劑為鄭州安圖生物工程有限公司試劑盒；酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝病毒標(biāo)志物試劑為上海科華生物工程股份有限公司試劑盒， 選擇實(shí)驗(yàn)儀器為芬蘭生產(chǎn)的-k3酶標(biāo)儀。

　　1. 2. 2 檢測方法 對采集的200份血清標(biāo)本分別采用化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法與酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行乙肝病毒標(biāo)志物檢測， 每次以定值參比血清作為質(zhì)控， 檢測方法嚴(yán)格按照儀器及試劑說明書進(jìn)行。酶聯(lián)免疫吸附法采用手工添加樣品， 檢測結(jié)果根據(jù)酶標(biāo)儀結(jié)果顯示判定為陽性或陰性；化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法采用全自動加樣器添加樣品， 用LUMO半自動分析儀定量檢測結(jié)果。

　　另取1.0 ng/ml HBsAg定值參比血清， 兩倍稀釋后分別采用以上兩種檢測方法檢驗(yàn)， 測定兩種檢驗(yàn)方法的最低濃度。

　　1. 3 判定標(biāo)準(zhǔn)2] 檢測結(jié)果大于參考值的上限為陽性， 5項(xiàng)檢測指標(biāo)的上限標(biāo)準(zhǔn)分別為HBsAg：0.2 ng/ml， HBeAg：0.05 NCU/ml， HBeAb：2.0 NCU/ml， HBcAb：1.5 NCU/ml， HBsAb：10.0 mIU/ml。對單獨(dú)一項(xiàng)為陽性或弱陽性或雙陽性標(biāo)本設(shè)置雙空復(fù)查， 結(jié)果仍為陽性的則判定為陽性。分別統(tǒng)計(jì)各檢測指標(biāo)陽性、陰性的例數(shù)。

　　1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　　2 結(jié)果

　　2. 1 兩種方法檢測5種乙肝標(biāo)志物陽性結(jié)果比較 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法對HBsAg及HBeAb的檢出率明顯高于酶聯(lián)免疫吸附法（P<0.05）；兩種方法對hbeag、 p="">0.05）。見表1。

　　2. 2 靈敏度檢測 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法檢測的最低濃度為0.12 ng/ml， 酶聯(lián)免疫吸附法檢測的最低濃度為0.4 ng/ml�；瘜W(xué)免疫酶免疫分析法的檢測靈敏度高于酶聯(lián)免疫吸附法。

　　3 討論

　　乙肝病毒血清標(biāo)志物2]是乙型病毒性肝炎的主要病原標(biāo)志， 基于我國嚴(yán)峻的乙型肝炎疫情與不斷增加的乙型肝炎患者， 采用有效的病原標(biāo)志物檢測方法對乙肝的早期防治與乙肝藥物治療效果的評定具有重要意義。

　　酶聯(lián)免疫吸附法3]是檢測乙肝標(biāo)志物的目前應(yīng)用最廣泛的方法， 采用人工加樣， 具有操作簡單、快捷的檢測優(yōu)勢。但通過臨床研究發(fā)現(xiàn)4]， 乙肝病毒測定結(jié)果為弱陽性患者在復(fù)查中也容易出現(xiàn)時陰時陽的情況， 采用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行復(fù)查， 結(jié)果的重復(fù)性較差， 說明酶聯(lián)免疫吸附法靈敏性不高， 對臨界結(jié)果的檢測效率低。同時， 酶聯(lián)免疫吸附法容易受試劑盒質(zhì)量、儀器校準(zhǔn)、工藝差別等眾多原因的影響， 其檢測結(jié)果可能存在較大差別， 穩(wěn)定性較差。隨著化學(xué)發(fā)光酶免疫分析技術(shù)的不斷發(fā)展， 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法在乙肝病毒標(biāo)志物的檢測中逐步展現(xiàn)了其較高的應(yīng)用價(jià)值�；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫分析法是借助發(fā)光底物自身的發(fā)光強(qiáng)度進(jìn)行測定的分析技術(shù)， 相比于酶聯(lián)免疫吸附法靈敏度較高。本次調(diào)查結(jié)果對200份血清樣本分別進(jìn)行化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝病毒標(biāo)志物， 結(jié)果顯示， 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析對HBsAg的檢出率為60.0%， 對HBeAb的檢出率為24.0%， 明顯高于酶聯(lián)免疫吸附法的54.5%、17.5%（P<0.05）；另經(jīng)靈敏度檢測， 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法檢測的最低濃度為0.12 ng/ml， 酶聯(lián)免疫吸附法檢測的最低濃度為0.4 ng/ml， 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法的檢測靈敏度高于酶聯(lián)免疫吸附法。

　　綜上所述， 酶聯(lián)免疫吸附法具有操作簡單、方便快捷的優(yōu)勢， 但化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法可有效檢測出病毒標(biāo)志物中的假陰性情況， 檢測結(jié)果穩(wěn)定性高、重復(fù)率高， 對準(zhǔn)確顯示乙肝病毒的感染進(jìn)程、評價(jià)抗病毒治療效果具有重要意義。為保證測定效果， 臨床采用化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法檢測結(jié)果更準(zhǔn)確， 可有效減少漏檢、誤檢的發(fā)生率。

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