橡膠膠乳特異表達(dá)鋅指蛋白基因分離、克隆及表達(dá)分析
論文摘要: 天然橡膠是產(chǎn)膠植物的一種次生代謝物,它具有耐高溫、高彈性等突出優(yōu)點(diǎn),是合成橡膠不可比擬的一種世界性工業(yè)原料和重要的戰(zhàn)略物資,具有極高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值及應(yīng)用前景.天（略）源于大戟科的巴西橡膠樹(Hevea brasiliensis),目前有關(guān)巴西橡膠樹形態(tài)、（略）培學(xué)等方面的研究已取得了較大的進(jìn)展,產(chǎn)膠量也達(dá)到了一定的水平.但隨著對天然橡膠需求的日益增長,如何進(jìn)一步提高橡膠樹的產(chǎn)膠量已成為天然橡膠行業(yè)亟待解決的重大課題,尤其在傳統(tǒng)的技術(shù)與方法基礎(chǔ)上,急待探索提高膠乳產(chǎn)量的新途徑. 膠乳里存在著特異表達(dá)的基因,其中包（略）控因子,它們與橡膠生物合成和植物抗逆等密切相關(guān).本研究旨在分離與克隆這些特異表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,并研究它們在（略）下的表達(dá)情況,為探究其與橡膠合成相關(guān)基因之間的調(diào)控關(guān)系奠定基礎(chǔ).這對于進(jìn)一步闡明橡膠生物合成的分子機(jī)制具有重要的意義,同時(shí)還能為橡膠樹轉(zhuǎn)基因高產(chǎn)抗逆育種的研究提供材料和理論依據(jù). 本研究通過對橡膠葉與膠乳mRNA的提取,對其逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA經(jīng)Cy3、Cy5熒光染料標(biāo)記后（略）交,雜交數(shù)據(jù)結(jié)果顯示,在橡膠膠乳中上調(diào)表達(dá)顯著的基因共有1...
Natural rubber, which （omitted）ct of secondary metabolite, is a very important industrial material. Its unique properties make it can not be replaced by a（omitted）tive synthetic materials. Hevea brasilien（omitted） most important plant producing natural rubber because of its higher yield and excellent quality. However, the （omitted）at there are some factors to limit the rubber production, which makes the yield（omitted） far behind the demand in industry. It is urgent to explore new approaches to im...
目錄:摘要 第4-5頁
Abstract 第5頁
1 前言 第9-24頁
·橡膠生物合成分子生物學(xué)研究進(jìn)展 第9-12頁
·橡膠生物合成分子生物學(xué)研究現(xiàn)狀與不足 第9-10頁
·激素對橡膠生物合成的調(diào)控及其分子生物學(xué)研究現(xiàn)狀與不足 第10-11頁
·橡膠轉(zhuǎn)錄因子研究現(xiàn)狀與分析 第11頁
·植物鋅指蛋白與橡膠膠乳產(chǎn)生的關(guān)聯(lián)性分析 第11-12頁
·差異表達(dá)基因的篩選技術(shù) 第12-16頁
·mRNA差異顯示技術(shù)(DDRT-PCR) 第12頁
·RNA隨機(jī)引物聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RAP-PCR) 第12-13頁
·代表性差異分析(cDNA-RDA) 第13頁
·抑制消減雜交(SSH) 第13-15頁
·cDNA微陣列在檢測表達(dá)差異基因中的應(yīng)用 第15頁
·基因表達(dá)序列分析(SAGE) 第15-16頁
·應(yīng)用擬南芥cDNA微陣列芯片研究非模式植物的轉(zhuǎn)錄譜 第16頁
·鋅指蛋白的研究進(jìn)展 第16-22頁
·鋅指蛋白的結(jié)構(gòu) 第17-18頁
·鋅指蛋白的分類 第18頁
·鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控機(jī)理 第18-19頁
·與逆境脅迫相關(guān)的植物鋅指蛋白 第19-22頁
·與鹽脅迫有關(guān)的鋅指蛋白 第20頁
·與冷脅迫有關(guān)的鋅指蛋白 第20-21頁
·與干旱脅迫有關(guān)的鋅指蛋白 第21頁
·與氧脅迫有關(guān)的鋅指蛋白 第21頁
·與強(qiáng)光脅迫有關(guān)的鋅指蛋白 第21-22頁
·本研究的目的和意義 第22-23頁
·技術(shù)路線 第23-24頁
2 材料與方法 第24-34頁
·材料 第24-25頁
·植物材料來源 第24頁
·菌株和質(zhì)粒 第24頁
·生化試劑 第24頁
·質(zhì)粒載體 第24頁
·工具酶及分子量標(biāo)準(zhǔn) 第24頁
·試劑盒 第24頁
·主要化學(xué)試劑 第24頁
·芯片選擇 第24頁
·主要儀器設(shè)備 第24頁
·引物列表 第24-25頁
·方法 第25-34頁
·利用cDNA微陣列篩選差異表達(dá)基因 第25-29頁
·膠乳RNA的提取 第25-26頁
·CTAB結(jié)合TRNzol~-A~+提取葉片總RNA 第26頁
·RNA純化 第26-27頁
·RNA的瓊脂糖凝膠電泳檢測 第27頁
·總RNA的濃度檢測 第27頁
·對樣品RNA進(jìn)行熒光標(biāo)記(晶芯~(?)cRNA擴(kuò)增標(biāo)記試劑盒) 第27頁
·雜交與清洗 第27-28頁
·芯片掃描 第28頁
·芯片圖像的采集與數(shù)據(jù)分析 第28-29頁
·生物信息學(xué)分析 第29頁
·橡膠C3HC4型鋅指蛋白基因的克隆 第29-32頁
·橡膠基因組DNA的提取 第29-30頁
·cDNA第一鏈合成 第30頁
·PCR 第30頁
·PCR產(chǎn)物的回收與純化 第30-31頁
·載體連接 第31頁
·重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化 第31頁
·菌落PCR檢測 第31-32頁
·激素處理后的表達(dá)分析 第32-34頁
·實(shí)驗(yàn)材料處理 第32頁
·膠乳RNA的提取 第32頁
·RT-PCR 第32頁
·Real-Time PCR 第32-34頁
3. 結(jié)果與分析 第34-49頁
·膠乳特異表達(dá)基因的獲得 第34-37頁
·膠乳RNA和葉片RNA的提取 第34頁
·基因芯片表達(dá)譜 第34-35頁
·芯片雜交結(jié)果 第35-36頁
·芯片結(jié)果分析 第36-37頁
·四個(gè)鋅指蛋白基因的克隆 第37-41頁
·基因組DNA的質(zhì)量檢測 第38-39頁
·基因克隆 第39-40頁
·內(nèi)含子分析 第40-41頁
·四個(gè)鋅指蛋白基因在激素刺激下的表達(dá)差異分析 第41-45頁
·RNA質(zhì)量檢測 第41-42頁
·real-time PCR結(jié)果 第42-45頁
·鋅指蛋白基因與橡膠轉(zhuǎn)移酶基因的關(guān)聯(lián)性分析 第45-49頁
4. 討論 第49-55頁
·微陣列雜交種關(guān)鍵技術(shù)問題及解決方法 第49-51頁
·k Aabidopsis Genome Array芯片說明 第49頁
·芯片質(zhì)量控制 第49-50頁
·對弱雜交信號(hào)的處理 第50頁
·芯片假陽性問題的處理 第50-51頁
·微陣列雜交結(jié)果對研究橡膠代謝合成途徑的價(jià)值 第51頁
·橡膠DNA、RNA的提取 第51-52頁
·關(guān)于熒光定量PCR的實(shí)驗(yàn) 第52-53頁
·cDNA質(zhì)量的檢測 第53頁
·關(guān)于激素作用下鋅指蛋白的功能 第53-55頁
5. 結(jié)論 第55-56頁
參考文獻(xiàn) 第56-62頁
縮略詞表 第62-63頁
附錄 第63-68頁
致謝 第68頁
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