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金斛春沖劑安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)
作者：鄭定仙 趙毓梅 黃業(yè)宇 林衛(wèi)華
關(guān)鍵字： 毒理學(xué)
摘要：目的 對(duì)金斛春沖劑的食用安全性進(jìn)行毒理學(xué)評(píng)價(jià)。 方法 采用急性毒性試驗(yàn)、遺傳毒性試驗(yàn)(Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn))、30d喂養(yǎng)試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)評(píng)價(jià)。 結(jié)果 雌雄小鼠經(jīng)口LD50均大于200g/kg體重，Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)三項(xiàng)遺傳毒性試驗(yàn)結(jié)果均為陰性。500g/kg體重之劑量30d喂養(yǎng)試驗(yàn)未見明顯毒性作用。 結(jié)論 金斛春沖劑急性毒性分級(jí)屬無(wú)毒級(jí)、無(wú)遺傳毒性，初步估計(jì)最大無(wú)損害作用劑量大于5g/kg體重，相當(dāng)于人體推薦攝入量的100倍。
關(guān)鍵詞：金斛春沖劑；急性毒性；遺傳毒性；最大無(wú)損害作用劑量；食用安全性
Abstract:Objective To evaluate toxicologically the edible safty of Jinhuchun granule Methods Acute toxity test’Ames test’Micronucieus test’Sperm shape abnornality test and thirty days feeding test were performed Results The oral LD50 in male or female mice was higher than 200g/kgbwAmes test’micronecleus test and sperm shape abnormality were postiveNo synificant toxicity was detected in Thirty days feeding test Conclusion Jinhuchun granule has no acute toxicity’no genotoxicity’maximalnoobservdadverseeffect level(MNOAEL) is more than one handred times proposal daily intake amount in human
Key words:Jinhuchun granule;Acute toxicity;Genotoxicity;MNOAEL;Edible safety
金斛春沖劑主要成份為鐵皮石斛。鐵皮石斛屬蘭科植物，具有生津養(yǎng)胃，清熱養(yǎng)陰之功效［1］。某企業(yè)擬開發(fā)利用其作為保健食品，為評(píng)價(jià)其食用安全性，我們進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)、Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)和30d喂養(yǎng)試驗(yàn)。
1 材料和方法
11 材料 金斛春沖劑，人體每日推薦攝入量為3g/60kg體重。樣品呈黃、淡黃、綠3色顆粒狀。用蒸餾水將其溶解配制成所需濃度供試驗(yàn)使用。
12 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，由中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：中科動(dòng)管第003號(hào)。SD大鼠，由上海西普爾―必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。合格證號(hào)：滬動(dòng)合證字152號(hào)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室溫度：22～27℃，濕度60%～70%。
13 實(shí)驗(yàn)方法
131 急性毒性試驗(yàn) 選昆明種小鼠雌雄各10只(18～22g)，試驗(yàn)前禁食14h，不禁水。設(shè)200g/kg體重1個(gè)劑量組，灌胃給藥2次(灌胃容量為20ml/kg體重)，間隔2h，2次量合并作為1次劑量計(jì)算。觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物2周，記錄中毒表現(xiàn)及死亡情況，按毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)急性毒性強(qiáng)弱。
132 遺傳毒性試驗(yàn)
1321 Ames試驗(yàn) 采用平板摻入法，選鼠傷寒沙門氏菌突變型菌株TA97、TA98、TA100和TA102，經(jīng)基因型鑒定合格后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。具體方法參照文獻(xiàn)［2］。
1322 小鼠骨髓微核試驗(yàn) 選昆明種小鼠60只(25～３０g)，隨機(jī)分為6組，雌雄各半。設(shè)125、250、500、1000g/kg體重4個(gè)劑量組、陰性對(duì)照組(蒸餾水)及陽(yáng)性對(duì)照組(環(huán)磷酰胺40mg/kg體重)。具體方法參照文獻(xiàn)［2］。
1323 小鼠精子畸形試驗(yàn) 選雄性昆明種小鼠25只(25～35g)，隨機(jī)分為5組，每組5只。設(shè)250、500、1000g/kg體重3個(gè)劑量組、陰性對(duì)照組(蒸餾水)及陽(yáng)性對(duì)照組(環(huán)磷酰胺30mg/kg體重)。具體方法參照文獻(xiàn)［2］。
133 30d喂養(yǎng)試驗(yàn) 選SD大鼠80只，其中雄性40只，體重為(943±78)g；雌性40只，體重為(888±108)g。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為4組，每組20只，雌雄各半。設(shè)125、250、500g/kg體重3個(gè)劑量組(相當(dāng)于人體推薦攝入量的25、50、100倍)和1個(gè)對(duì)照組，具體方法參照文獻(xiàn)［2］。實(shí)驗(yàn)結(jié)束觀察體重、總食物利用率、血常規(guī)指標(biāo)、血液生化學(xué)指標(biāo)和進(jìn)行病理學(xué)檢查。
14 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析與處理 全部數(shù)據(jù)采用SPSS軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理(小鼠骨髓微核試驗(yàn)用雙側(cè)t檢驗(yàn)，小鼠精子畸形試驗(yàn)用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，其余用單因素方差分析)。
21 急性毒性試驗(yàn) 給予受試物后，各組動(dòng)物飲食和活動(dòng)正常，生長(zhǎng)發(fā)育良好，均未見明顯中毒反應(yīng)，無(wú)一死亡。該樣品雌雄小鼠經(jīng)口LD50均大于200g/kg體重，根據(jù)急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，屬無(wú)毒級(jí)。
22 遺傳毒性試驗(yàn)
221 Ames試驗(yàn) 各劑量組的回變菌落數(shù)均未超過空白對(duì)照組的2倍，而陽(yáng)性對(duì)照組的回變菌落數(shù)均超過空白對(duì)照組的2倍。
222 小鼠骨髓微核試驗(yàn) 經(jīng)雙側(cè)t檢驗(yàn)，各劑量組雌雄小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核率與陰性對(duì)照組比較差別無(wú)顯著性(P＞005)；而陽(yáng)性對(duì)照組微核率與陰性對(duì)照組比較差別具有高度顯著性(P＜001)。
223 小鼠精子畸形試驗(yàn) 經(jīng)Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，各劑量組精子畸形率與陰性對(duì)照組比較差別無(wú)顯著性(P＞005)；而陽(yáng)性對(duì)照組精子畸形率與陰性對(duì)照組比較差別具有高度顯著性(P＜001)。
23 30d喂養(yǎng)試驗(yàn)
231 一般表現(xiàn) 實(shí)驗(yàn)期間各組動(dòng)物活動(dòng)正常，未見明顯中毒反應(yīng)。
232 對(duì)大鼠體重、總食物利用率的影響 經(jīng)方差分析，各組雌雄鼠體重、進(jìn)食量、食物利用率與對(duì)照組比較差別無(wú)顯著性(P＞005)。結(jié)果見表1。表1 金斛春沖劑對(duì)大鼠總食物利用率的影響
233 血常規(guī)檢查結(jié)果 雌雄鼠各劑量組血紅蛋白、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類與對(duì)照組比較差別無(wú)顯著性(P＞005)，表明該樣品對(duì)大鼠血紅蛋白、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類無(wú)明顯影響。
234 血液生化檢查結(jié)果 雌雄鼠各劑量組血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐、膽固醇、甘油三酯、血糖、總蛋白、白蛋白與對(duì)照組比較無(wú)明顯異常改變。結(jié)果見表2。表2 金斛春沖劑對(duì)大鼠生化指標(biāo)的影響
235 病理組織學(xué)檢查 各劑量組動(dòng)物解剖大體觀察末見有異常變化。各劑量組肝體比、腎體比、脾體比和睪丸體比或卵巢體比與對(duì)照組比較差別無(wú)顯著性(P＞005)。病理組織學(xué)檢查可見，鏡下高劑量組動(dòng)物肝臟漿膜完整，中央靜脈、肝小葉、門管區(qū)結(jié)構(gòu)清楚，肝細(xì)胞索圍繞中央靜脈呈放射狀排列；腎臟被膜完整，皮質(zhì)腎小球、腎小囊結(jié)構(gòu)清楚，腎小管排列規(guī)則；胃腸漿膜、肌層、粘膜、粘膜下層結(jié)構(gòu)清楚；脾被膜完整，紅髓、白髓結(jié)構(gòu)清楚；睪丸白膜完整，可見各級(jí)生精細(xì)胞；卵巢白膜完整，可見各級(jí)卵泡。均未見病理組織學(xué)改變。
3 討論
目前，國(guó)內(nèi)開發(fā)鐵皮石斛作為食品或保健食品的報(bào)道不多，其毒理學(xué)研究資料也不多，為確保金斛春沖劑食用安全，依據(jù)衛(wèi)生部《食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法》［2］的規(guī)定，我們選擇了一組試驗(yàn)檢測(cè)金斛春沖劑的急性毒性、遺傳毒性和無(wú)損害作用劑量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，金斛春沖劑雌雄性小鼠經(jīng)口LD50大于200g/kg體重，根據(jù)急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，屬無(wú)毒級(jí)；小鼠精子畸形試驗(yàn)、Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓微核試驗(yàn)結(jié)果均為陰性；30d喂養(yǎng)對(duì)雌雄大鼠體重、總食物利用率、臟體比、血常規(guī)以及血液生化指標(biāo)均無(wú)明顯影響，肝、腎、脾、胃、十二指腸、睪丸和卵巢均未見病理組織學(xué)改變。初步估計(jì)金斛春沖劑的最大無(wú)損害作用劑量大于5g/kg體重，相當(dāng)于人體推薦攝入量的100倍。綜上所述，金斛春沖劑在本實(shí)驗(yàn)研究劑量范圍內(nèi)對(duì)人體不產(chǎn)生有害作用，可安全食用。
參考文獻(xiàn)：
［1］ 中藥大辭典［M］第1版上海：上海人民出版社，1977，7：1209～1210
［2］ 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法(GB15193)［S］199411～41
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