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簡析益氣活血片對人工寒潮誘發(fā)腦卒的影響論文
腦卒中是當今嚴重危害人類健康的三大疾病之一， 具有發(fā)病率高， 病死率高， 致殘率高等特點。腦梗死是腦血管病的主要類型。隨著社會老齡化進程的加快， 腦梗死的發(fā)病率和病死率都將會進一步提高，因此研究如何防治腦梗死具有臨床意義。目前研究認為在腦梗死的發(fā)病機制中， 血纖溶系統(tǒng)與凝血系統(tǒng)的功能狀態(tài)起著重要的作用。本研究從調節(jié)機體凝血和纖溶系統(tǒng)功能平衡的作用出發(fā)， 觀察益氣活血片對人工寒潮誘發(fā)大鼠腦卒中的影響， 為臨床治療腦梗死提供理論依據， 現(xiàn)報道如下。
1 對象與方法
1. 1 實驗動物
SPF 級SD 純種雄性大鼠80 只，體質量80 ～ 120 g， 購自廣州中醫(yī)藥大學大學城實驗動物中心， 許可證號(廣東省實驗動物檢測所檢測)： SCXK (粵) 2008-0020， 采用廣州中醫(yī)藥大學動物中心的常規(guī)飼料和蒸餾水喂養(yǎng)。
1. 2 主要試劑與儀器
ALC-NIBP 無創(chuàng)血壓測量分析系統(tǒng)(上海奧爾科特生物科技有限公司) ;LRH-XXX-GSI 型氣候箱(韶關市泰宏醫(yī)療器械有限公司); 拜阿斯匹林腸溶片(拜耳醫(yī)藥保健有限公司， 批號： BJ08409); ActichromeTAFI 活性試劑盒(American Diagnostic Inc); 蛋白C 活性發(fā)色底物法試劑盒(上海船夫生物技術有限公司)。
1. 3 藥物
益氣活血片組成： 黃芪1 000 g， 益母草150 g， 當歸90 g， 川芎90 g， 全蝎90 g， 石菖蒲90 g， 冰片10 g。由廣州中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院制劑室提供。
1. 4 高血壓模型復制
采用雙腎雙夾法復制易卒中型腎血管性高血壓性大鼠模型[2]。具體方法： 采用100 mg/L 水合氯醛(300 mg/kg) 腹腔麻醉， 備皮， 清潔消毒， 鋪孔巾， 沿劍突下1 ～ 2 cm 部位向下劃開2 ～ 3 cm 的切口， 依次打開腹腔， 先定位左側腎臟， 再定位右側腎臟， 自制小夾鉗夾雙側腎動脈， 回納胃腸于腹中合適位置， 依次縫合， 獨立飼養(yǎng)1 d。采用ALC-NIBP 無創(chuàng)血壓測量分析系統(tǒng)經尾動脈測定大鼠收縮壓， 造模后每周測量1 次， 并正確記錄血壓值， 造模成功標準為血壓峰值達到并穩(wěn)定在20 kPa 以上。
1. 5 人工寒潮模擬
采用LRH-XXX-GSI 型氣候箱模擬自然寒潮， 依據本省氣象局的規(guī)定標準， 達到以下條件即可認為寒潮來臨： ①在24 h 內平均溫度驟然下降8℃或以上; ②48 h 內平均溫度降低10℃或以上; ③同時整個過程最低溫度≤5℃。在造模術后112 d 高血壓大鼠已到達高血壓晚期， 將4 組大鼠分別置于人工氣候箱中， 在溫度22℃、相對濕度65%的狀態(tài)下飼養(yǎng)12 h， 再將溫度設置為4℃、相對濕度不變， 12 h 為1 d 循環(huán)， 共3 d。
1. 6 實驗分組與給藥
在高血壓造模術前隨機抽取20 只大鼠作為空白對照組; 在高血壓早期即造模術后14 d 將高血壓模型大鼠隨機分為3 組開始給藥。益氣活血片組以1.89 g·kg-1·d-1 劑量灌胃(益氣活血片用量按人與動物間體表面積折算的等效劑量比值表計算); 阿斯匹林組以拜阿斯匹林腸溶片溶于5 g/L 羧甲基纖維素鈉中， 制成懸濁液，用時搖勻， 劑量為80 mg·kg-1·d-1; 模型組以蒸餾水2 mL 灌胃， 1 次/d; 空白對照組自由飲用蒸餾水。4 組大鼠連續(xù)灌服至造模術后112 d。
1. 7 觀察指標
1. 7. 1 體質量、血壓測定大鼠體質量采用電子秤測定; 大鼠血壓采用ALC-NIBP 無創(chuàng)血壓測量分析系統(tǒng)測定。
1. 7. 2 凝血和纖溶體系檢測在寒潮后從每組中抽取實驗大鼠， 以水合氯醛(100 mg/L， 300 mg/kg)麻醉大鼠后， 消毒備皮， 從右心房或下腔靜脈取血1～3mL， 放入枸櫞酸鈉試管(0.109 mmol/L， 0.11 mL)抗凝， 將離心機溫度設置為4℃， 開始離心。血漿凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI) 用1 500 r/min 離心15 min， 蛋白C (PC) 用3 000 r/min 離心10 min，凝血酶—抗凝血酶復合物(TAT) 采用2 000 r/min離心10 min， 纖溶酶(PAP) 采用5 000 r/min 離心10 min， 移液器收集上清液， -80℃保存， 3 個月內測試。血漿TAFI、PC 水平采用發(fā)色底物法檢測。血漿TAT、PAP 水平采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測。甲醇、乙醇等試劑均為分析純試劑。
1. 8 統(tǒng)計方法
采用SPSS 13.0 軟件進行統(tǒng)計處理。計量資料以均數± 標準差(x ± s) 表示， 多組比較采用方差分析， 先行方差齊性檢驗， 方差齊，采用q 檢驗; 方差不齊， 則采用秩和檢驗。
2 結果
2. 1 各組大鼠血壓結果顯示： 治療前中藥組、模型組、阿司匹林組血壓均較空白對照組顯著升高(P<0.05); 治療后中藥組血壓較模型組顯著降低(P<0.05)。
2. 2 凝血和纖溶系統(tǒng)變化結果顯示： 模型組血漿TAFI、PC、TAT、PAP 水平較空白對照組均顯著升高(P<0.05) ; 中藥組可顯著降低血漿TAFI、PC、TAT、PAP 水平， 與模型組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
3 討論
TAFI 和PC 是凝血、纖溶反應中一對重要因子， 兩者與腦卒中發(fā)病的關系已被廣泛研究。TAT 的升高是體內高凝血狀態(tài)的標記， 而PAP 的升高是體內高纖溶狀態(tài)的標記。人工寒潮時， 高血壓大鼠內環(huán)境發(fā)生劇烈變化， 凝血/抗凝系統(tǒng)、纖溶/抗纖溶系統(tǒng)平衡可被打破， 當機體狀態(tài)趨向于有利凝血發(fā)生如血壓下降、血液濃縮等情況時，某一血管局部凝血啟動引起血栓形成或梗死。在高血壓大鼠血管病變如管壁透明變性、纖維素樣壞死和微動脈瘤形成等血管薄弱部位， 當纖溶活性增強損傷血管內皮和基底膜， 血壓突然升高時更易出現(xiàn)血管破裂出血。因此， 寒潮時血漿中TAFI、PC、TAT、PAP 水平升高提示梗塞或出血的危險性增加， 可能與中風事件如腦梗死或腦出血的發(fā)生有一定關系。
祖國醫(yī)學認為， 久病正虛， 正氣不足， 血脈運行無力， 氣血運行不暢， 血脈瘀滯， 血外滲而為水， 水停而為痰， 痰瘀搏結， 遇風引觸， 風痰瘀血閉阻脈絡而發(fā)為中風。因此扶正以抗邪， 也就成為了預防中風病發(fā)病的重要方法。而益氣活血法是臨床治療中風的常用之法。益氣活血片由黃芪、當歸、石菖蒲、川芎、全蝎、益母草、冰片等藥物組成， 有益氣養(yǎng)血、活血滌痰的作用。中藥藥理研究表明： 組方內藥物具有提高神經元的抗損傷能力、預防神經元尼氏體損傷、改善神經功能缺損的癥狀等作用。前期研究亦證實益氣活血片能降低腦梗塞模型大鼠血小板黏附分子的高表達狀態(tài)。本研究結果表明： 益氣活血片組經歷寒潮后血漿TAFI、PC、TAT、PAP水平較模型組顯著降低， 差異均有統(tǒng)計學意義。表明益氣活血片可能通過激活體內抗凝系統(tǒng)、纖溶系統(tǒng)，降解交聯(lián)纖維蛋白， 刺激血管內皮細胞釋放NO 以抑制血小板聚集、白細胞黏附， 保護血管內膜以及抑制和/或減輕靜脈血栓形成后的炎癥反應等途徑， 降低人工寒潮促發(fā)腦卒中的機率， 達到防治腦卒中目的，確切機制有待進一步研究。
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