血型鑒定和交叉配血技術(shù)的進(jìn)展
醫(yī)學(xué)界在輸血治療手段出現(xiàn)之初，曾發(fā)生過(guò)無(wú)數(shù)血的教訓(xùn)。1492年，首例輸血由于使用的方法很原始，沒有成功病人死亡;1667年法國(guó)國(guó)王御醫(yī)Jean用羊血治療精神病患者，償試將動(dòng)物血輸給人導(dǎo)致死亡，這一嚴(yán)重事故使以后150多年沒人再敢嘗試輸血治療。1818年，英國(guó)產(chǎn)科醫(yī)生James Blundell首次用人血輸治患者，取得一定效果。1900年奧地利維也納大學(xué)科學(xué)家Karl Landsteiner發(fā)現(xiàn)ABO血型及Rh血型系統(tǒng)，增加了人類對(duì)血型系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)。直到1907年，Hektoen建議通過(guò)獻(xiàn)血者和受血者之間的交叉配血才提高了輸血的安全性，Reuben Ottenberg完成了首例使用血型和交叉配血的輸血實(shí)驗(yàn)，開啟了現(xiàn)代輸血醫(yī)學(xué)的新紀(jì)元職稱論文。
輸血前試驗(yàn)包括血型鑒定、抗體篩選和交叉配血，其中交叉配血是關(guān)鍵[1]。交叉配血是在血型鑒定的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步證實(shí)血型測(cè)定是否有誤，以及受血者和供血者之間是否存在血型不合的抗原抗體反應(yīng)，以保證受血者的輸血安全。這一試驗(yàn)對(duì)于未進(jìn)行紅細(xì)胞血型抗體篩選的患者尤為重要，紅細(xì)胞血型抗體有完全抗體和不完全抗體。完全抗體為分子量較大的IgM抗體，可在鹽水介質(zhì)的交叉配血中與相應(yīng)的紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng);不完全抗體指ABO系統(tǒng)以外的其他血型抗體，為分子量較小的IgG抗體，在鹽水介質(zhì)中雖然能夠結(jié)合紅細(xì)胞上的抗原，但不能使紅細(xì)胞凝集，必須通過(guò)特定的方法使致敏紅細(xì)胞發(fā)生凝集。根據(jù)紅細(xì)胞血型抗體的特性，血型鑒定和交叉配血方法在不斷產(chǎn)生，其檢測(cè)技術(shù)也在不斷發(fā)展。
1、鹽水交叉配血法
鹽水法配血時(shí)，用生理鹽水配制紅細(xì)胞懸液，紅細(xì)胞膜上由于唾液酸中的羧基離子而帶負(fù)電，此負(fù)電荷形成的排斥力 (Zeta 電位) 使單個(gè)紅細(xì)胞之間保持一定的距離，當(dāng)其與血清相配合時(shí)，血清中的大分子完全抗體，能在相應(yīng)紅細(xì)胞之間搭橋，使其發(fā)生凝集，通過(guò)觀察凝集或溶血來(lái)判斷配血結(jié)果。鹽水法是交叉配血的必做項(xiàng)目，能簡(jiǎn)便快速的檢測(cè)IgM型抗體，發(fā)現(xiàn)血型是否錯(cuò)誤或判斷是否發(fā)生溶血，但不能檢出不完全I(xiàn)gG型抗體[2,3]，不能有效的防止免疫性溶血性和非溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生，因此單用鹽水法配血存在一定的危險(xiǎn)性。
2、抗人球蛋白交叉配血法(AGT)
1908年Carlo Moreschi利用分子搭橋的原理記錄了抗人球蛋白試驗(yàn)。此法又稱Coombs試驗(yàn)，分為檢測(cè)紅細(xì)胞表面有無(wú)不完全抗體的直接抗人球蛋白試驗(yàn)和檢測(cè)血清中有無(wú)不完全抗體的間接抗人球蛋白試驗(yàn)，是最經(jīng)典、最早用于檢查不完全抗體的方法，是目前交叉配血的金標(biāo)準(zhǔn)。本法靈敏，但是傳統(tǒng)的抗人球方法，操作繁雜、反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng)、結(jié)果不易判斷和統(tǒng)一、試劑效期短，不能滿足輸血檢測(cè)及時(shí)準(zhǔn)確的要求，因而未被國(guó)內(nèi)廣泛采用。
3、酶介質(zhì)交叉配血法
酶法是采用蛋白水解酶(如菠蘿酶、木瓜酶等)進(jìn)行配血的方法。酶可以破壞紅細(xì)胞表面帶電荷的唾液酸，從而降低紅細(xì)胞表面電荷，使其得以靠攏，因而能使具有特異性的不完全抗體與經(jīng)酶處理的具有相應(yīng)抗原紅細(xì)胞發(fā)生凝集。此法的特點(diǎn)是操作較為簡(jiǎn)便，經(jīng)濟(jì)，但較難質(zhì)控，時(shí)間長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性較差，而且酶可能部分的改變紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使某些隱蔽的抗原得以暴露，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性;有的抗原經(jīng)過(guò)消化后便消失活力，真陽(yáng)性變成假陰性。因此，此法也有一定的局限性。
4、凝聚胺交叉配血法(MPT)
1980年P(guān)alezari和Jiang首先將凝聚胺技術(shù)應(yīng)用在血庫(kù)作業(yè)上。凝聚胺交叉配血，是利用低離子介質(zhì)減少紅細(xì)胞周圍的陽(yáng)離子云，以促進(jìn)紅細(xì)胞與血清或血漿中抗體結(jié)合。聚凝膠分子是帶有高價(jià)陽(yáng)離子多聚季鍍鹽，溶解后帶有很多正電荷可以中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷，有利于紅細(xì)胞凝集，低離子強(qiáng)度溶液也能減低紅細(xì)胞的Zeta電位，可進(jìn)一步增加抗原抗體間的吸引力。當(dāng)血清中存在IgM或IgG類血型抗體時(shí)，與紅細(xì)胞發(fā)生緊密結(jié)合，此時(shí)加入枸櫞酸鹽解聚液以消除聚凝膠的正電荷，使IgM或IgG類血型抗體與紅細(xì)胞產(chǎn)生凝集不會(huì)散開;如果血清中不存在IgM或IgG類血型抗體，加入解聚液可使非特異性凝集消失。此法可以檢出IgM與IgG兩種性質(zhì)的抗體，能發(fā)現(xiàn)可引起溶血性輸血反應(yīng)的幾乎所有完全與不完全抗體。據(jù)報(bào)道，凝聚胺法應(yīng)用于血型鑒定、交叉配血、不完全抗體的篩選，其靈敏度及特異性遠(yuǎn)高于其他介質(zhì)的1-250倍，尤其是Rh系統(tǒng)抗體，但對(duì)IgG抗-AB抗體的檢出能力較低[4，5，6]。此法操作簡(jiǎn)便、快速，在一些基層醫(yī)院均已廣泛使用。聚凝胺法雖然簡(jiǎn)便快速，但有可能漏檢重要的Kell血型系統(tǒng)[7]及血液中低效價(jià)的不規(guī)則抗體[8]，而且易受到溫度、氣候、臨床藥物、試劑及操作因素的干擾，而使交叉配血出現(xiàn)一些異常結(jié)果[9]。
5、微柱凝膠交叉配血法(MGT)
又稱微管(板)凝膠抗球蛋白試驗(yàn)。1988年發(fā)明的微柱凝膠配血法使抗人球蛋白應(yīng)用于輸血常規(guī)檢測(cè)成為現(xiàn)實(shí)，它保持了傳統(tǒng)抗球蛋白試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，而且方法簡(jiǎn)單，易于批量操作[10]，是新發(fā)展的一項(xiàng)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)。此法可在全自動(dòng)血型分析儀上進(jìn)行，成為國(guó)際安全輸血檢查的推薦方法，目前國(guó)外已廣泛應(yīng)用[11]。
微柱凝膠法是凝膠過(guò)濾技術(shù)和抗原抗體反應(yīng)的結(jié)合，在微量柱中充滿特制的凝膠介質(zhì)或細(xì)小的玻璃珠介質(zhì)，介質(zhì)之間的間隙只能使單個(gè)紅細(xì)胞變形通過(guò)，起到類似細(xì)胞篩的作用。紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體發(fā)生凝聚反應(yīng)，經(jīng)離心后不能完全到達(dá)柱的底部，而呈現(xiàn)陽(yáng)性，全部沉到底部者為陰性。微柱依據(jù)血清反應(yīng)特點(diǎn)和試劑不同分為不含特異性抗體的中性柱、含特異性抗體的特異性柱、用于檢測(cè)IgG類不完全抗體和交叉配血的抗球蛋白柱。此法基本原理雖然與抗人球蛋白法相同，但一般認(rèn)為抗人球蛋白更為可靠，而微柱凝膠法有發(fā)生漏檢的可能。這是因?yàn)槲⒅z法需要在凝膠內(nèi)離心，少量微弱凝集的'紅細(xì)胞在離心外力的作用下可能會(huì)散開，或者由于具有易變性的紅細(xì)胞在通過(guò)凝膠孔時(shí)變形通過(guò)，從而使微弱陽(yáng)性凝集漏檢。與手工凝聚胺MPT法相比，微柱法靈敏度高，能捕捉到十分微弱的抗原抗體反應(yīng)因而結(jié)果更準(zhǔn)確，交叉配血時(shí)其靈敏度較MPT法高約1-5個(gè)滴度[12]。微柱凝膠法具有操作簡(jiǎn)便、結(jié)果穩(wěn)定、重復(fù)性好、標(biāo)本用量少且結(jié)果可保存等優(yōu)點(diǎn)，試驗(yàn)時(shí)增加了孵育步驟，也減少了冷凝集對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。但有文獻(xiàn)[6]報(bào)道，微柱凝膠法對(duì)致敏紅細(xì)胞和IgG抗-AB血清的檢出能力低于抗人球蛋白法和凝聚胺法，對(duì)IgG抗-D血清的檢出能力高于抗人球蛋白法和凝聚胺法;且紅細(xì)胞懸液濃度過(guò)高時(shí)因離心力不足或離心時(shí)間過(guò)短、血清中含纖維蛋白出現(xiàn)細(xì)胞凝塊或血液標(biāo)本被細(xì)菌污染、血漿中的蛋白質(zhì)(包括IG和補(bǔ)體)非特異性的吸附到患者的紅細(xì)胞表面而發(fā)生非特異性凝集反應(yīng)[13]。
6、現(xiàn)狀及措施
隨著臨床輸血技術(shù)的快速發(fā)展，血型鑒定和交叉配血方法不斷的更新和完善，很好的保證了病人的輸血安全。但在一些基層醫(yī)院由于信息溝通不夠，技術(shù)還很原始，血型鑒定和交叉配血方法仍停留在鹽水法。由于鹽水配血法只能檢測(cè)出不相合的完全抗體，因此除鹽水法外，還需要應(yīng)用其它的配血方法來(lái)檢測(cè)是否存在不完成抗體，以避免不完全抗體造成的輸血反應(yīng)。由于傳統(tǒng)抗人球蛋白法、酶法本身的局限以及微柱凝膠法儀器昂貴、試劑成本高，目前大多數(shù)的基層醫(yī)院，在未能常規(guī)開展紅細(xì)胞不完全抗體篩查情況下，只能采用鹽水法加凝聚胺配血法來(lái)進(jìn)行輸血前配血試驗(yàn)。
段慧玲等[14]報(bào)道，幾種交叉配血方法的靈敏度依次為：微柱凝膠法>凝聚胺法>鹽水法。目前，國(guó)外基本采用微柱凝膠法，國(guó)內(nèi)也正在普及。何子毅[15]、羅志[16]的研究表明，微柱凝膠法、抗人球蛋白法和凝聚胺法用于交叉配血檢測(cè)IgG型抗體，如果超出其最低檢測(cè)限，均存在陽(yáng)性漏檢的現(xiàn)象。因此我們建議在日常交叉配血工作中，采用多種方法同時(shí)做交叉配血試驗(yàn)，以防止供受血者血液中存在的效價(jià)較低、或效價(jià)較低、親合力也較低的IgG抗體漏檢。此外，有些交叉配血試驗(yàn)，由于受到過(guò)高量的球蛋白的影響，試驗(yàn)結(jié)果也可出現(xiàn)假陽(yáng)性，此時(shí)應(yīng)對(duì)結(jié)果做進(jìn)一步鑒定，以確保交叉配血結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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