幾種水溶性維生素對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性的作用

幾種水溶性維生素對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性的作用 【摘要】 目的 探索研究幾種水溶性維生素（VitB1、VitB6、VitB12 and VitC）對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性的作用。方法 采用改良的MTT法，來(lái)檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性。結(jié)果 VitB1 50μl (0.0025μg), VitB6 200μl (0.002μg), VitB12 200μl (0.002μg), VitC 200μl(0.08μg)均對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞有活性增強(qiáng)作用。結(jié)論 幾種水溶性維生素（VitB1、VitB6、VitB12 and VitC）對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性有增強(qiáng)作用。

　　【關(guān)鍵詞】 水溶性維生素；MTT法；小鼠巨噬細(xì)胞

　　To study the activation of in vitro mice macrophages with various water soluble vitamins

　
　　【Abstract】 Objective To propose studying the effect of various water soluble vitamins ( VitB1,VitB6,VitB12 and VitC ) of in vitro mice macrophages activation. Methods The article took the modified method of MTT to explose the activation of in vitro mrice macrophages. Results VitB150μl (0.0025μg), VitB6 200μl (0.002μg), VitB12 200μl (0.002μg), VitC 200μl(0.08μg) all stimulated the effect of in vitro mice macrophages. Conclusion Various water soluble vitamins( VitB1,VitB6,VitB12 and VitC )which were able to stimulate the activation of in vitro mice macrophages under certain concentration.

　　【Key words】 water soluble vitamin; MTT method; mice macrophage

　　維生素是維持人體正常生理功能及細(xì)胞內(nèi)各種能量代謝生化反應(yīng)所必需的一類低分子量有機(jī)化合物。盡管機(jī)體對(duì)這類物質(zhì)需求量相對(duì)很少，但是它們卻十分重要，是人體必不可少的微量物質(zhì)，如果缺乏，可引起各種各樣的疾病。因此某些種類維生素對(duì)人體的免疫系統(tǒng)的免疫功能也起著重要作用，影響免疫系統(tǒng)的各種細(xì)胞功能。最近許多年，國(guó)內(nèi)外營(yíng)養(yǎng)免疫學(xué)者都在研究探討各種維生素對(duì)免疫系統(tǒng)的作用，企圖探明各種維生素對(duì)免疫細(xì)胞活化的增強(qiáng)或抑制，為提高機(jī)體免疫力，本文選用和人類基因組具有相當(dāng)部分同源性小鼠，選用 體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)維生素B1、B6、B12和維生素C對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性作用的研究。 Mosmon(1983)［1］報(bào)道噻唑藍(lán)（MTT）比色法，經(jīng)后人改良，使這種方法更加完善成熟，成為定量、重復(fù)性好、簡(jiǎn)便易行檢測(cè)免疫細(xì)胞活性的好方法。我們采用此法，檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的活性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

　　1 材料與方法

　　1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和主要試劑及實(shí)驗(yàn)儀器 ICR小鼠體重（20±2）g，雄性，由首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。RPMI1640培養(yǎng)液為Hyclmone公司產(chǎn)品。噻唑藍(lán)（MTT）為Sigma公司產(chǎn)品，10%十二烷基磺酸鈉（SDS）為BRL公司產(chǎn)品，淋巴細(xì)胞分離液為TBD生物技術(shù)發(fā)展中心產(chǎn)品，液體石蠟油為北京旭東化工廠產(chǎn)品， VitB1 （5mg/ ml）、VitB6 （5mg/ ml）、VitB12 （0.5mg/ ml）均為天津金耀氨基酸有限公司產(chǎn)品， VitC（400mg/ ml）為北京雙鶴藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，酶標(biāo)儀為SLT公司產(chǎn)品（型號(hào)為A-5082）。

　　1.2 方法 （1）對(duì)小鼠腹腔注射（VitB1 、VitB6 、VitB12 和VitC，無(wú)菌液體石蠟油），取ICR小鼠40只分成4組，每組10只，分別為1組、2組、3組和4組。1組為VitB1實(shí)驗(yàn)組，第1天對(duì)其中5只小鼠腹腔注射無(wú)菌生理鹽水 0.2ml/只，作為對(duì)照，另外5只小鼠腹腔注射VitB1 0.05ml/只作為實(shí)驗(yàn)組。2組為VitB6 實(shí)驗(yàn)組，第1天對(duì)其中5只小鼠腹腔注射無(wú)菌生理鹽水 0.2ml/只，作為對(duì)照，另外5只小鼠腹腔注射VitB6 0.2ml/只作為實(shí)驗(yàn)組。3組為VitB12 實(shí)驗(yàn)組，第1天對(duì)其中5只小鼠腹腔注射無(wú)菌生理鹽水 0.2ml/只，作為對(duì)照，另外5只小鼠腹腔注射VitB120.2ml /只作為實(shí)驗(yàn)組。4組為VitC 實(shí)驗(yàn)組，第1天對(duì)其中5只小鼠腹腔注射無(wú)菌生理鹽水 0.2ml /只，作為對(duì)照，另外5只小鼠腹腔注射VitC 0.2ml/只作為實(shí)驗(yàn)組。以上4組小白鼠經(jīng)腹腔注射生理鹽水和維生素，均于48h后再經(jīng)腹腔注射無(wú)菌液體石蠟油0.1ml /只。48h后行頸椎脫臼處死。（2）巨噬細(xì)胞的制備：將處死的小白鼠行腹部皮膚消毒后，持鑷提起腹中部皮膚并剪開(kāi)，暴露腹膜，避開(kāi)血管剪開(kāi)腹膜一小口。用毛細(xì)吸管取出腹腔液，并收集于試管中。作好標(biāo)記后離心，棄上清，洗3次，立即進(jìn)行臺(tái)盼藍(lán)染色，計(jì)算活細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)108/ ml。（3）噻唑藍(lán)比色法，將制備的小鼠巨噬細(xì)胞按組分管，每組實(shí)驗(yàn)管（孔）3管（孔）對(duì)照管（孔）3管（孔）。37℃溫育2h后，每管加10%SDS（溶于雙蒸水），輕輕震蕩，待甲簪顆粒完全釋放后，再用酶標(biāo)儀測(cè)OD570值。

　　2 結(jié)果

　　2.1 VitB1對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性的作用 VitB1對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性的作用，VitB150μl（0.0025μg）對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性有增 強(qiáng)作用，P

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