毛畢吸蟲成蟲分離方法的研究初報

毛畢吸蟲成蟲分離方法的研究初報 　摘　要　目的　為提高毛畢吸蟲成蟲的收集率。方法　對家鴨行離體或在體肝靜脈逆行灌注收集肝內(nèi)和門靜脈內(nèi)成蟲；同時對家鴨灌注降主動脈，以收集肝內(nèi)、門靜脈內(nèi)和腸系膜靜脈的成蟲。結果　應用上述方法可收集到大量活的無損傷的成蟲。結論　灌注法優(yōu)于解剖法，且簡便、快捷，實用性強。

PRELIMIARY STUDY ON THE METHODS OF SEPARATING

　　　ABSTRACT Aim To improve the collecting rate of the adult worms of Trichobiharzia.Methods The adult worms in vena portae and hepaticae interna were collected by the methods of exsomatization and retrograde pouring in vena of livers of ducks.The adult worms in livers,vena portae and vena mesenterica of ducks were collected by the method of pouring aorta descendens.Results A lot of non-traumatic living adult worms and non-traumat could be collected by these methords.The collecting rate of the pouring was significantly higher than that of other methords(p＜0.05).Conclusions The method of pouring was more simple,direct,practical and was better than that of dissection.

　　KEY WORDS Trichobiharzia adult worm pouring collecting method

　　毛畢屬（Trichobilharzia）吸蟲為鳥類血吸蟲，其尾蚴可侵襲人體引起變態(tài)反應性皮炎，該屬吸蟲宿主較多，家鴨是毛畢屬吸蟲主要的終宿主之一［1～10］。從家鴨體內(nèi)分離出成蟲，是研究其形態(tài)、結構并進行分類的重要基礎。作者在淮河水系毛畢屬吸蟲研究的過程中，對毛畢吸蟲成蟲的分離方法進行了初步研究，取得了較為滿意的結果，現(xiàn)報道如下。

　　1　材料和方法

　　1.1　材料

　　1.1.1　病鴨　用毛畢屬吸蟲尾蚴（50條）人工感染的、并在院動物房內(nèi)飼養(yǎng)30天以上的雛鴨（為當?shù)鼐用穹趸�的家鴨）；購自當�(shù)鼐用瘢�漁民及農(nóng)民）于毛畢吸蟲流行水域內(nèi)放養(yǎng)1年以上的陽性家鴨。

　　1.1.2　藥品器材　肝素（Ehter.批號：930407，上海浦江應用生物化學研究所。）乙醚（Diethylether，批號：960423，宜興市第二化學試劑廠）、注射器、9號注射針頭、吊瓶、解剖針、橡皮導管、玻璃導管、手術刀、剪等。

　　1.2　方法

　　1.2.1　肝門靜脈、腸系膜靜脈解剖法　將病鴨（其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽性的家鴨）固定在解剖臺上，用乙醚麻醉后，剖開胸腹部，將肝門靜脈和肝靜脈結扎，用眼科剪、解剖針和“0”號毛筆剖檢肝門靜脈和腸系膜靜脈分離成蟲。即從較細的腸系膜靜脈開始，分段以解剖針刺破靜脈，并以解剖針從靜脈遠端驅(qū)趕血液（成蟲）從刺破處流出，用毛筆輕取流出血液至含有生理鹽水的平皿中，用生理鹽水反復清洗換水，直至蟲體被洗凈為止。最后在解剖鏡下收集成蟲。

　　1.2.2　在體肝臟灌注法　將病鴨（其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽性的家鴨）固定在兔解剖臺上，在翅根部靜脈注射2ml肝素鈉（12500U），隨即用乙醚麻醉后剖開胸腹部，暴露內(nèi)臟（操作中應避免劃傷心臟和肝臟）。接著在肝靜脈出口遠端和門靜脈起始端各作一切口，分別插入導入管和導出管（上述兩管可由普通玻璃吸管替代，其長短、粗細根據(jù)鴨子的大小與靜脈的粗細選用）。將含有生理鹽水的500ml吊瓶，置于2.5m高處，通過輸液皮條與導入管相連，接通生理鹽水，生理鹽水和成蟲一起即可從門靜脈導出管口流出（抬高導入端解剖臺效果尤佳）。

　　當流出液中含有較多組織液和血液時，可在量杯中換水沉淀幾次，每次5min。若流出液較清晰，立即吸入小培養(yǎng)皿內(nèi)，在解剖鏡下或用肉眼直接分檢。

　　1.2.3　離體肝臟灌注法　將病鴨（其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽性的家鴨）固定在解剖臺上，在翅膀根部注射2ml肝素鈉。隨即用乙醚麻醉后解剖，暴露內(nèi)臟。用止血鉗或縫合線分別夾（扎）住肝靜脈和門靜脈起始端，仔細分離肝臟，并移至平皿內(nèi)。然后將連有生理鹽水吊瓶的吸管慢慢插入肝靜脈內(nèi)，接通生理鹽水進行灌注，將門靜脈流出液倒入300ml量杯內(nèi)，沉淀，換水2次，緩慢棄去上液，沉淀液倒入小平皿內(nèi)，在解剖鏡下或手持放大鏡用肉眼直接分檢。

　　1.2.4　肝門靜脈及腸系膜靜脈同時灌注法　將病鴨（其糞便經(jīng)毛蚴孵化為陽性的家鴨）固定在解剖臺上，在翅膀根部注入2ml肝素鈉，雛鴨酌減，用乙醚麻醉后，迅速打開胸腹腔，暴露內(nèi)臟。用止血鉗夾住肝靜脈，將連有生理鹽水吊瓶的9號針頭插入降主動脈內(nèi)，隨后將門靜脈起始端剪斷，用一漏斗放于大、小腸的下方。接通生理鹽水，流出液經(jīng)尼龍網(wǎng)過濾，將阻留物翻入含生理鹽水的培養(yǎng)皿中，直接鏡檢。

　　2　結果

　　2.1　肝門靜脈系統(tǒng)和腸系膜靜脈解剖法　分別解剖人工感染毛畢吸蟲尾蚴的雛鴨和在當?shù)亓餍袇^(qū)自然感染的家鴨各20只，共分離到完整的成蟲388條（雌蟲349條，雄蟲39條）。其中從人工感染毛畢屬吸蟲尾蚴的雛鴨體內(nèi)共分離成蟲138條（雌蟲127條，雄蟲11條），每只雛鴨檢獲成蟲數(shù)目不等，最少3條，最多26條，平均6.9條；從自然感染的家鴨體內(nèi)共分離成蟲250條（雌蟲194條，雄蟲56條），每只家鴨檢獲的成蟲2～72條，平均12.5條。從40只家鴨體內(nèi)均分離到活體成蟲，此外尚有部分蟲體斷片。

　　2.2　在體肝臟灌注法　分別灌注人工感染毛畢吸蟲尾蚴的雛鴨20只和在當?shù)亓餍袇^(qū)自然感染的家鴨35只。共分離成蟲2546條（雌蟲1393條，雄蟲1153條）。其中從人工感染毛畢屬吸蟲尾蚴的雛鴨體內(nèi)檢獲成蟲699條（雌蟲249條，雄蟲350條），每只雛鴨檢獲成蟲5～38條，平均34.95條；從自然感染的家鴨體內(nèi)共檢獲成蟲1847條（雌蟲932條，雄蟲915條），每只家鴨檢獲成蟲12～86只，平均52.77條。從55只家鴨體內(nèi)分離到的成蟲均為活蟲。

　　2.3　離體肝臟灌注法　分別灌注人工感染的病鴨6只和自然感染的病鴨10只，共分離成蟲2495條（雌蟲1215條，雄蟲1280條）。其中人工感染的病鴨檢獲成蟲192條（雌蟲95條，雄蟲97條），每只人工感染的病鴨檢獲成蟲22～41條，平均32條；從自然感染的病鴨檢獲成蟲2303條（雌蟲1006條，雄蟲1297條），每只病鴨檢獲成蟲186～315條，平均230.3條。從16只病鴨檢獲的成蟲均為活蟲。

　　2.4　肝門靜脈及腸系膜靜脈灌注法　分離人工感染的雛鴨10只和在流行區(qū)購買的陽性家鴨10只，分別檢獲成蟲448條（雌蟲197條，雄蟲251條）和2554條（雌蟲1231條，雄蟲1323條）。每只人工感染的病鴨檢獲成蟲22～56條，平均45條；每只購自流行區(qū)的陽性家鴨檢獲成蟲194條～396條，平均255條。從20只病鴨所分離的成蟲均為活蟲。

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