肺炎克雷伯菌β?內(nèi)酰胺酶檢測與相關(guān)耐藥表型分析
�。坳P(guān)鍵詞］ 肺炎克雷伯菌；β?內(nèi)酰胺酶；耐藥性；呼吸科
質(zhì)粒介導(dǎo)的超廣譜β?內(nèi)酰胺酶(ESBLs)的產(chǎn)生和傳播是革蘭陰性桿菌對β?內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的重要原因之一［1］。肺炎克雷伯菌是最常見的產(chǎn)ESBLs菌株［2］，已成為醫(yī)院感染的重要病原菌之一，可造成嚴(yán)重的醫(yī)院感染暴發(fā)和院外耐藥菌株的傳播［3］。特別是質(zhì)粒介導(dǎo)的ESBLs因其底物譜廣、傳播速度快而引起廣泛關(guān)注。我們對2003年1月至2005年12月本院呼吸科分離的肺炎克雷伯菌進(jìn)行了抗生素敏感度測定及對產(chǎn)ESBLs菌株進(jìn)行了檢測，現(xiàn)報(bào)道如下。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 菌株 肺炎克雷伯菌來源于2003年1月至2005年12月本院呼吸科患者送檢痰標(biāo)本，10天內(nèi)分離出相同菌種取第1次分離株。
1.1.2 試劑 API試條、M?H瓊脂(法國梅里埃公司產(chǎn)品)，藥敏紙片：頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢噻肟/棒酸、頭孢他啶/棒酸購于英國Oxoid公司，其他藥敏紙片購于杭州天和微生物試劑廠。
1.2 方法
1.2.1 菌種鑒定 根據(jù)《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》操作，采用API試條和APILAB PLUS細(xì)菌鑒定系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定。
1.2.2 藥敏試驗(yàn) 采用K?B法，結(jié)果判讀按NCCLS 2002年推薦標(biāo)準(zhǔn)。
1.2.3 ESBLs檢測 采用雙紙片協(xié)同試驗(yàn)法，選取對頭孢噻肟耐藥或中介耐藥的肺炎克雷伯菌株，按常規(guī)紙片擴(kuò)散法在M?H瓊脂平板上涂布受試菌，先在平板中心貼上20 μg/1 μg阿莫西林/克拉維酸紙片，爾后在其上下左右貼30 μg/片頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢他啶和氨曲南紙片，其紙片中心距復(fù)合劑紙片中心30 mm或20 mm，35 ℃孵育18 h～20 h。如周圍4個(gè)藥敏紙片中有任何一個(gè)抑菌環(huán)在靠近復(fù)合紙片一側(cè)的邊緣出現(xiàn)擴(kuò)大或增強(qiáng)，說明該菌產(chǎn)ESBLs。如結(jié)果可疑或協(xié)同試驗(yàn)陰性，但K?B藥敏結(jié)果提示可能產(chǎn)ESBLs，則用確證試驗(yàn)驗(yàn)證，結(jié)果按美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)2002年推薦的標(biāo)準(zhǔn)判讀。ESBLs陰性質(zhì)控株為大腸埃希菌ATCC 25922，ESBLs陽性質(zhì)控菌為ATCC 700603。
2 結(jié)果
2.1 ESBLs檢出率 3年中從下呼吸道感染標(biāo)本中共檢出256株肺炎克雷伯菌，其中有94株產(chǎn)ESBLs，檢出率為36.7%(94/256)，較盧小軍等［4］報(bào)道的19.6%要高得多，較朱冬林等［5］報(bào)道的43.1%低。3年中呼吸科下呼吸道感染標(biāo)本中產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌分離率，分別為33.3%(20/60)、37.5%(30/80)、37.9%(44/116)。
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