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電針和半夏瀉心湯對(duì)功能性消化不良大鼠胃動(dòng)素的影響
功能性消化不良(functional dyspepsia,F(xiàn)D)是慢性持續(xù)或反復(fù)發(fā)作的上腹痛或不適、腹脹、噯氣、早飽、厭食、惡心、嘔吐、燒心、胸骨后隱痛或反胃等,病程超過12周以上,經(jīng)各項(xiàng)檢查排除器質(zhì)性疾病的一組消化內(nèi)科的臨床癥候群[1]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)多采用促動(dòng)力藥、質(zhì)子泵抑制劑、粘膜保護(hù)劑和抗抑郁劑等藥物治療[2],中醫(yī)藥多施以針灸和調(diào)理脾胃的方藥,如調(diào)和脾胃之代表方劑半夏瀉心湯。本研究觀察了電針和半夏瀉心湯單用及合用對(duì)FD模型大鼠血漿、胃竇及下丘腦組織中胃動(dòng)素(motilin,MTL)含量的影響,現(xiàn)報(bào)道如下。
1 材料與方法
1.1 動(dòng)物與分組
健康成年SD大鼠,共60只,體質(zhì)量為180~250g,雌雄不拘,由安徽省全椒安立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證:SCXK(蘇)2002-0002。大鼠隨機(jī)分為6組,每組10只,即正常對(duì)照組(常規(guī)飼養(yǎng),未作任何處理)、模型組(夾尾刺激處理造模)、西藥組(造模后給予2.82g·kg-1· d-1枸櫞酸莫沙必利水溶液灌胃治療,連續(xù)7 d)、電針組(造模后給予電針治療)、中藥組(造模后給予中藥灌胃治療)、電針加中藥組(造模后給予電針及中藥灌胃治療)。
1.2 藥品與儀器
氨基甲酸乙酯(烏拉坦),批號(hào)960101,由上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)站提供;PCE程控電針治療儀,由安徽中醫(yī)學(xué)院針灸經(jīng)絡(luò)研究所研制;MTL放免藥盒,由解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所(原北京東亞免疫技術(shù)研究所)提供。
1.3 FD模型復(fù)制
參照文獻(xiàn)[3]介紹的方法,采用夾尾刺激引發(fā)大鼠打斗。結(jié)果大鼠出現(xiàn)緊張、焦慮反應(yīng),進(jìn)食量明顯減少,毛色變暗、枯黃、不順,與上述文獻(xiàn)報(bào)道基本一致,說明造模成功。
1.4 中藥制備
半夏瀉心湯水煎劑所用中藥購自安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中藥房,經(jīng)安徽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中藥教研室鑒定,均為正品。生藥劑量比例按原方根據(jù)文獻(xiàn)[4]方法換算,取人用劑量(3.3g/kg)的10倍。藥物以蒸餾水煎煮30min,提取2次,合并煎液并過濾,水浴加熱蒸發(fā)濃縮為1g/mL,貯于冰箱中備用。造模后以33g·kg-1·d-1劑量開始給藥,每日1次灌胃,連續(xù)7 d。
1.5 電針處理
造模后,將大鼠放置于特制的固定器內(nèi),動(dòng)物保持清醒安靜狀態(tài),根據(jù)"大鼠穴位圖譜"(江蘇省中醫(yī)藥研究所華興幫研究員等用模擬骨度法繪制而成),選取大鼠雙側(cè)"足三里"穴(ST36)為針刺穴位。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)將大鼠左右后肢膝關(guān)節(jié)外下方(即腓骨小頭下方)體毛除去,確定穴位(腓骨小頭下方5mm處)后用苦味酸作標(biāo)記,1寸毫針刺入。以電針儀給予電刺激,頻率為20~100 Hz的疏密波混頻刺激,輸出電壓4~6 V,以大鼠下肢輕微顫抖為度,持續(xù)電針20min,每日1次,連續(xù)7 d。
1.6 取材
禁食24 h,取材前用氨基甲酸乙酯(烏拉坦)1.0g·kg-1腹腔注射麻醉大鼠后,進(jìn)行標(biāo)本采集。
廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)2007年第24卷第5期方正清,等.電針和半夏瀉心湯對(duì)功能性消化不良大鼠胃動(dòng)素的影響1.6.1 血液采集 打開腹腔,由腹主動(dòng)脈采血;取血1.5 mL置于含100g/L乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)30μL和抑肽酶30μL試管中混勻,室溫放置20min,4℃、3 500r/min離心20min,取血漿-20℃保存,用于測定血漿MTL的含量。
1.6.2 胃、腸組織采集 取近幽門部胃竇組織,用電子天平迅速稱質(zhì)量后以m胃組織:V生理鹽水=1∶5的比例放入煮沸的生理鹽水中繼續(xù)煮沸3min,加入1mol/L冰醋酸0.5mL于勻漿器中制成勻漿,放置1~2h,再用相應(yīng)體積的1mol/L NaHCO3中和,4℃、3 000r/min離心30min,取上清液,-20℃保存,用于測定胃竇組織中MTL的含量。取空腸起始段近端腸組織,迅速稱質(zhì)量后制成勻漿(方法同胃竇組織),4℃、3 000r/min離心30min,取上清液,-20℃保存,用于測定腸組織中MTL的含量。
1.6.3 腦組織采集 快速剝離大鼠腦組織,按照文獻(xiàn)[5]所標(biāo)記的相應(yīng)位置,在冰盤上切取大鼠下丘腦,迅速稱質(zhì)量后制成勻漿(方法同胃竇組織),于4℃、3 000r/min離心30min,取上清液,-20℃保存,用于測定下丘腦組織中MTL含量。
1.7 檢測方法
采用放射免疫法檢測,嚴(yán)格按照試劑盒說明書方法進(jìn)行。
1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
采用SPSS for Windows 11.0軟件分析。
2 結(jié)果
表1結(jié)果顯示,模型組血漿、胃竇組織、空腸組織、下丘腦組織中的MTL含量下降,與正常對(duì)照組比較,差異有顯著性意義(P<0.05或P<0.01);各治療組與模型組比較,血漿、胃竇組織、空腸組織及下丘腦組織MTL含量均顯著性升高(P<0.01);電針組胃竇組織MTL含量及電針組、中藥組下丘腦組織MTL含量與電針加中藥組比較,差異均有顯著性意義(P<0.01)。
3 討論
FD發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜,可能與胃動(dòng)力障礙、胃感覺異常、胃腸電節(jié)律紊亂和社會(huì)心理功能障礙等胃源性因素關(guān)系密切,其發(fā)病機(jī)制的研究焦點(diǎn)是胃腸動(dòng)力學(xué)。盡管FD可能為一組異常情況下的癥狀表現(xiàn),但動(dòng)力紊亂在其病理生理中具有重要的意義。表1 各組FD大鼠血漿和胃竇、空腸及下丘腦組織中MTL含量的比較FD患者中約50%伴有胃腸動(dòng)力紊亂,有餐后胃排空遲緩和胃動(dòng)力低下,或下食管括約。↙ES)壓力減低,胃肌電異常(節(jié)律障礙),幽門機(jī)能不協(xié)調(diào),并有腸道運(yùn)動(dòng)或膽道運(yùn)動(dòng)障礙等。胃腸運(yùn)動(dòng)障礙在FD中的發(fā)病作用已得到肯定。研究發(fā)現(xiàn)在大多數(shù)哺乳動(dòng)物的胃腸道壁粘膜內(nèi)分泌細(xì)胞及中樞、外周和胃腸道壁內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)中存在MTL。MTL是由22個(gè)氨基酸組成的多肽,其生理功能是促進(jìn)消化道運(yùn)動(dòng),加速胃排空,對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)尤其對(duì)消化間期移行復(fù)合運(yùn)動(dòng)(inter?digestive migrating motor complex,MMC)有重要調(diào)節(jié)作用,MTL常在MMCⅢ相達(dá)到高峰,參與MMCⅢ相收縮,被認(rèn)為是一種消化間期激素[6-8]。
中醫(yī)學(xué)將FD歸入"痞滿"、"胃痛"、"嘈雜"、"胃緩"等范疇。臨床上以肝胃不和多見,故本實(shí)驗(yàn)選擇此類模型。董建華教授[9]認(rèn)為FD應(yīng)從肝脾胃論治,脾虛是發(fā)病的基礎(chǔ),肝郁是發(fā)病的條件,胃氣不降是引發(fā)諸癥的原因。健脾、疏肝、降胃為基本治則。半夏瀉心湯是《傷寒論》中重要的和解方之一,由七味藥物組成,其中"半夏、干姜辛開而溫,以散脾氣之寒;黃芩、黃連苦瀉而寒,以降胃氣之熱;人參、甘草、大棗甘溫調(diào)補(bǔ),和脾胃,補(bǔ)中氣,以復(fù)中焦升降功能,此即辛開苦降甘補(bǔ)之法",具有和胃降逆、開結(jié)除痞的功能,廣泛用于胃腸道疾病的治療[10]。
李蕙等[11]在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),肝胃不和型FD大鼠不僅存在獨(dú)立的胃腸動(dòng)力障礙,胃竇、十二指腸協(xié)調(diào)收縮次數(shù)也顯著降低,與胃竇、十二指腸收縮變化不一致有關(guān),是肝胃不和型FD一個(gè)重要的影響因素,并推測胃腸MMCⅢ相異常、胃腸協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)障礙可能是肝胃不和型FD的發(fā)病機(jī)制之一。本研究結(jié)果表明,模型組大鼠血漿和下丘腦及胃腸組織內(nèi)MTL含量較正常對(duì)照組顯著性降低(P<0.05或P<0.01),提示模型組大鼠胃動(dòng)力障礙,胃節(jié)律紊亂,胃動(dòng)力低下;由于結(jié)腸功能紊亂,動(dòng)力障礙,可表現(xiàn)腹瀉或便秘樣結(jié)腸動(dòng)力傳輸改變[12],與李惠等的結(jié)論基本一致。電針刺激足三里穴、中藥復(fù)方半夏瀉心湯灌胃可改善FD大鼠胃腸電節(jié)律,增強(qiáng)FD大鼠的胃電活動(dòng),有效地改善胃、結(jié)腸動(dòng)力,協(xié)調(diào)胃、結(jié)腸運(yùn)動(dòng)[12]。而電針加中藥聯(lián)合干預(yù)組下丘腦組織MTL含量顯著性高于中藥和電針單因素干預(yù)組,提示電針和中藥對(duì)FD大鼠下丘腦組織MTL的調(diào)節(jié)有協(xié)同作用。各組FD大鼠血漿和下丘腦及胃腸組織內(nèi)MTL含量的變化,提示電針和半夏瀉心湯對(duì)FD大鼠胃腸電的調(diào)整作用可能是通過刺激中樞和(或)外周釋放MTL,而MTL作為調(diào)節(jié)因子可傳遞信息。針刺足三里穴后,針感傳入到下丘腦特定結(jié)構(gòu)中的胃動(dòng)素能神經(jīng)元以及相關(guān)肽能神經(jīng)和神經(jīng)遞質(zhì),再激活外周腸神經(jīng)系統(tǒng)胃動(dòng)素能神經(jīng)元,啟動(dòng)胃腸運(yùn)動(dòng),改善協(xié)調(diào)胃腸運(yùn)動(dòng)。電針足三里穴和中藥復(fù)方半夏瀉心湯可調(diào)整血漿、胃腸及下丘腦組織中MTL水平,改善胃運(yùn)動(dòng)功能,其確切機(jī)制有待進(jìn)一步探討。
【參考文獻(xiàn)】
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[11]李蕙,李國成.肝胃不和型功能性消化不良大鼠胃動(dòng)素和p物質(zhì)的表達(dá)及中藥情志舒的干預(yù)作用[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志,2003,11(1):12.
[12]方正清,申國明,徐穎,等.電針和半夏瀉心湯對(duì)功能性消化不良大鼠胃腸電圖的影響[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,24(1):14.
功能性消化不良(functional dyspepsia,F(xiàn)D)是慢性持續(xù)或反復(fù)發(fā)作的上腹痛或不適、腹脹、噯氣、早飽、厭食、惡心、嘔吐、燒心、胸骨后隱痛或反胃等,病程超過12周以上,經(jīng)各項(xiàng)檢查排除器質(zhì)性疾病的一組消化內(nèi)科的臨床癥候群[1]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)多采用促動(dòng)力藥、質(zhì)子泵抑制劑、粘膜保護(hù)劑和抗抑郁劑等藥物治療[2],中醫(yī)藥多施以針灸和調(diào)理脾胃的方藥,如調(diào)和脾胃之代表方劑半夏瀉心湯。本研究觀察了電針和半夏瀉心湯單用及合用對(duì)FD模型大鼠血漿、胃竇及下丘腦組織中胃動(dòng)素(motilin,MTL)含量的影響,現(xiàn)報(bào)道如下。
1 材料與方法
1.1 動(dòng)物與分組
健康成年SD大鼠,共60只,體質(zhì)量為180~250g,雌雄不拘,由安徽省全椒安立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證:SCXK(蘇)2002-0002。大鼠隨機(jī)分為6組,每組10只,即正常對(duì)照組(常規(guī)飼養(yǎng),未作任何處理)、模型組(夾尾刺激處理造模)、西藥組(造模后給予2.82g·kg-1· d-1枸櫞酸莫沙必利水溶液灌胃治療,連續(xù)7 d)、電針組(造模后給予電針治療)、中藥組(造模后給予中藥灌胃治療)、電針加中藥組(造模后給予電針及中藥灌胃治療)。
1.2 藥品與儀器
氨基甲酸乙酯(烏拉坦),批號(hào)960101,由上;瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站提供;PCE程控電針治療儀,由安徽中醫(yī)學(xué)院針灸經(jīng)絡(luò)研究所研制;MTL放免藥盒,由解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所(原北京東亞免疫技術(shù)研究所)提供。
1.3 FD模型復(fù)制
參照文獻(xiàn)[3]介紹的方法,采用夾尾刺激引發(fā)大鼠打斗。結(jié)果大鼠出現(xiàn)緊張、焦慮反應(yīng),進(jìn)食量明顯減少,毛色變暗、枯黃、不順,與上述文獻(xiàn)報(bào)道基本一致,說明造模成功。
1.4 中藥制備
半夏瀉心湯水煎劑所用中藥購自安徽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中藥房,經(jīng)安徽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中藥教研室鑒定,均為正品。生藥劑量比例按原方根據(jù)文獻(xiàn)[4]方法換算,取人用劑量(3.3g/kg)的10倍。藥物以蒸餾水煎煮30min,提取2次,合并煎液并過濾,水浴加熱蒸發(fā)濃縮為1g/mL,貯于冰箱中備用。造模后以33g·kg-1·d-1劑量開始給藥,每日1次灌胃,連續(xù)7 d。
1.5 電針處理
造模后,將大鼠放置于特制的固定器內(nèi),動(dòng)物保持清醒安靜狀態(tài),根據(jù)"大鼠穴位圖譜"(江蘇省中醫(yī)藥研究所華興幫研究員等用模擬骨度法繪制而成),選取大鼠雙側(cè)"足三里"穴(ST36)為針刺穴位。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)將大鼠左右后肢膝關(guān)節(jié)外下方(即腓骨小頭下方)體毛除去,確定穴位(腓骨小頭下方5mm處)后用苦味酸作標(biāo)記,1寸毫針刺入。以電針儀給予電刺激,頻率為20~100 Hz的疏密波混頻刺激,輸出電壓4~6 V,以大鼠下肢輕微顫抖為度,持續(xù)電針20min,每日1次,連續(xù)7 d。
1.6 取材
禁食24 h,取材前用氨基甲酸乙酯(烏拉坦)1.0g·kg-1腹腔注射麻醉大鼠后,進(jìn)行標(biāo)本采集。
廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)2007年第24卷第5期方正清,等.電針和半夏瀉心湯對(duì)功能性消化不良大鼠胃動(dòng)素的影響1.6.1 血液采集 打開腹腔,由腹主動(dòng)脈采血;取血1.5 mL置于含100g/L乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)30μL和抑肽酶30μL試管中混勻,室溫放置20min,4℃、3 500r/min離心20min,取血漿-20℃保存,用于測定血漿MTL的含量。
1.6.2 胃、腸組織采集 取近幽門部胃竇組織,用電子天平迅速稱質(zhì)量后以m胃組織:V生理鹽水=1∶5的比例放入煮沸的生理鹽水中繼續(xù)煮沸3min,加入1mol/L冰醋酸0.5mL于勻漿器中制成勻漿,放置1~2h,再用相應(yīng)體積的1mol/L NaHCO3中和,4℃、3 000r/min離心30min,取上清液,-20℃保存,用于測定胃竇組織中MTL的含量。取空腸起始段近端腸組織,迅速稱質(zhì)量后制成勻漿(方法同胃竇組織),4℃、3 000r/min離心30min,取上清液,-20℃保存,用于測定腸組織中MTL的含量。
1.6.3 腦組織采集 快速剝離大鼠腦組織,按照文獻(xiàn)[5]所標(biāo)記的相應(yīng)位置,在冰盤上切取大鼠下丘腦,迅速稱質(zhì)量后制成勻漿(方法同胃竇組織),于4℃、3 000r/min離心30min,取上清液,-20℃保存,用于測定下丘腦組織中MTL含量。
1.7 檢測方法
采用放射免疫法檢測,嚴(yán)格按照試劑盒說明書方法進(jìn)行。
1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
采用SPSS for Windows 11.0軟件分析。
2 結(jié)果
表1結(jié)果顯示,模型組血漿、胃竇組織、空腸組織、下丘腦組織中的MTL含量下降,與正常對(duì)照組比較,差異有顯著性意義(P<0.05或P<0.01);各治療組與模型組比較,血漿、胃竇組織、空腸組織及下丘腦組織MTL含量均顯著性升高(P<0.01);電針組胃竇組織MTL含量及電針組、中藥組下丘腦組織MTL含量與電針加中藥組比較,差異均有顯著性意義(P<0.01)。
3 討論
FD發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜,可能與胃動(dòng)力障礙、胃感覺異常、胃腸電節(jié)律紊亂和社會(huì)心理功能障礙等胃源性因素關(guān)系密切,其發(fā)病機(jī)制的研究焦點(diǎn)是胃腸動(dòng)力學(xué)。盡管FD可能為一組異常情況下的癥狀表現(xiàn),但動(dòng)力紊亂在其病理生理中具有重要的意義。表1 各組FD大鼠血漿和胃竇、空腸及下丘腦組織中MTL含量的比較FD患者中約50%伴有胃腸動(dòng)力紊亂,有餐后胃排空遲緩和胃動(dòng)力低下,或下食管括約。↙ES)壓力減低,胃肌電異常(節(jié)律障礙),幽門機(jī)能不協(xié)調(diào),并有腸道運(yùn)動(dòng)或膽道運(yùn)動(dòng)障礙等。胃腸運(yùn)動(dòng)障礙在FD中的發(fā)病作用已得到肯定。研究發(fā)現(xiàn)在大多數(shù)哺乳動(dòng)物的胃腸道壁粘膜內(nèi)分泌細(xì)胞及中樞、外周和胃腸道壁內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)中存在MTL。MTL是由22個(gè)氨基酸組成的多肽,其生理功能是促進(jìn)消化道運(yùn)動(dòng),加速胃排空,對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)尤其對(duì)消化間期移行復(fù)合運(yùn)動(dòng)(inter?digestive migrating motor complex,MMC)有重要調(diào)節(jié)作用,MTL常在MMCⅢ相達(dá)到高峰,參與MMCⅢ相收縮,被認(rèn)為是一種消化間期激素[6-8]。
中醫(yī)學(xué)將FD歸入"痞滿"、"胃痛"、"嘈雜"、"胃緩"等范疇。臨床上以肝胃不和多見,故本實(shí)驗(yàn)選擇此類模型。董建華教授[9]認(rèn)為FD應(yīng)從肝脾胃論治,脾虛是發(fā)病的基礎(chǔ),肝郁是發(fā)病的條件,胃氣不降是引發(fā)諸癥的原因。健脾、疏肝、降胃為基本治則。半夏瀉心湯是《傷寒論》中重要的和解方之一,由七味藥物組成,其中"半夏、干姜辛開而溫,以散脾氣之寒;黃芩、黃連苦瀉而寒,以降胃氣之熱;人參、甘草、大棗甘溫調(diào)補(bǔ),和脾胃,補(bǔ)中氣,以復(fù)中焦升降功能,此即辛開苦降甘補(bǔ)之法",具有和胃降逆、開結(jié)除痞的功能,廣泛用于胃腸道疾病的治療[10]。
李蕙等[11]在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),肝胃不和型FD大鼠不僅存在獨(dú)立的胃腸動(dòng)力障礙,胃竇、十二指腸協(xié)調(diào)收縮次數(shù)也顯著降低,與胃竇、十二指腸收縮變化不一致有關(guān),是肝胃不和型FD一個(gè)重要的影響因素,并推測胃腸MMCⅢ相異常、胃腸協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)障礙可能是肝胃不和型FD的發(fā)病機(jī)制之一。本研究結(jié)果表明,模型組大鼠血漿和下丘腦及胃腸組織內(nèi)MTL含量較正常對(duì)照組顯著性降低(P<0.05或P<0.01),提示模型組大鼠胃動(dòng)力障礙,胃節(jié)律紊亂,胃動(dòng)力低下;由于結(jié)腸功能紊亂,動(dòng)力障礙,可表現(xiàn)腹瀉或便秘樣結(jié)腸動(dòng)力傳輸改變[12],與李惠等的結(jié)論基本一致。電針刺激足三里穴、中藥復(fù)方半夏瀉心湯灌胃可改善FD大鼠胃腸電節(jié)律,增強(qiáng)FD大鼠的胃電活動(dòng),有效地改善胃、結(jié)腸動(dòng)力,協(xié)調(diào)胃、結(jié)腸運(yùn)動(dòng)[12]。而電針加中藥聯(lián)合干預(yù)組下丘腦組織MTL含量顯著性高于中藥和電針單因素干預(yù)組,提示電針和中藥對(duì)FD大鼠下丘腦組織MTL的調(diào)節(jié)有協(xié)同作用。各組FD大鼠血漿和下丘腦及胃腸組織內(nèi)MTL含量的變化,提示電針和半夏瀉心湯對(duì)FD大鼠胃腸電的調(diào)整作用可能是通過刺激中樞和(或)外周釋放MTL,而MTL作為調(diào)節(jié)因子可傳遞信息。針刺足三里穴后,針感傳入到下丘腦特定結(jié)構(gòu)中的胃動(dòng)素能神經(jīng)元以及相關(guān)肽能神經(jīng)和神經(jīng)遞質(zhì),再激活外周腸神經(jīng)系統(tǒng)胃動(dòng)素能神經(jīng)元,啟動(dòng)胃腸運(yùn)動(dòng),改善協(xié)調(diào)胃腸運(yùn)動(dòng)。電針足三里穴和中藥復(fù)方半夏瀉心湯可調(diào)整血漿、胃腸及下丘腦組織中MTL水平,改善胃運(yùn)動(dòng)功能,其確切機(jī)制有待進(jìn)一步探討。
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