高效液相色譜法測定鹽酸溴己新片的含量
【摘要】 目的 建立高效液相色譜法測定鹽酸溴己新片的含量。方法 色譜柱：Alltima C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm);流動(dòng)相: 乙腈?0.05 mol·L-1磷酸鹽緩沖液(含0.2%三乙胺，pH=3.0)(體積比30∶70)，流速1.0 mL·min-1，檢測波長為249 nm 。 結(jié)果 鹽酸溴己新在66.0～96.4 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)線性良好(r=0.999 9，n=5),平均回收率為98.85%(RSD=0.60%,n=6)。結(jié)論 本法快速、簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好。
【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法;鹽酸溴己新;含量測定
Abstract: Objective To establish a method for content determination of bromhexine hydrochloride in tablets.Methods Bromhexine hydrochloride in the tablets was analyzed on an Alltima C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)column with mobile phase composed of acetonitrile?0.05 mol·L-1 phosphate buffer (30∶70, final pH3.0 adjusted with 0.2% triethylamine). The flow rate was 1.0 mL·min-1 with UV detection wavelength at 249 nm.Results Calibration graph was linear (r=0.9999, n=6) in concentration range 66.0?96.4 μg·mL-1 . The average recovery of bromhexine hydrochloride was 98.85% and RSD 0.60% (n=6).Conclusions The method is simple, rapid and reproducible.
Key words:HPLC;bromhexine hydrochloride
鹽酸溴己新是一種臨床上常用的祛痰藥，療效確切。目前鹽酸溴己新的含量測定方法有紫外分光光度法[1]、HPLC法[2]和毛細(xì)管電泳法[3]，中華人民共和國藥典2005年版收載的鹽酸溴己新片的含量測定方法為紫外分光光度法，但該法測含量專屬性不夠強(qiáng)，易受輔料干擾[4]。為系統(tǒng)評(píng)價(jià)其藥品質(zhì)量，確保臨床療效，本文建立了高效液相色譜法測定鹽酸溴己新含量的條件，并與紫外-可見分光光度法的測定結(jié)果做比較，結(jié)果表明高效液相色譜法更為簡便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)。
1、儀器與試藥
1.1儀器
島津LC?10AT型高效液相色譜儀，島津SPD?10A紫外檢測器;UV?2450型紫外?可見分光光度計(jì)
1.2試藥
鹽酸溴己新對(duì)照品(100427?200402，供含量測定用)購自中國藥品生物制品檢定所;鹽酸溴己新片(廣州南沙琪寶制藥有限公司，批號(hào)20060805，20060807，20060810);乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。
2、方法與結(jié)果
2.1色譜條件
色譜柱：Alltima C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm);流動(dòng)相：乙腈?0.05 mol·L-1磷酸鹽緩沖液(含0.2%三乙胺，pH=3.0)(體積比30∶70);檢測波長249 nm，流速1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量20 μL。色譜圖見圖1。
2.2溶液的制備
2.2.1對(duì)照品溶液的制備
精密稱取10.6 mg鹽酸溴己新對(duì)照品，置25 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 mL至10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，用0.45 μm的微孔薄膜濾過，即得質(zhì)量濃度為84.80 μg/mL的對(duì)照品溶液。
2.2.2供試品溶液的制備
精密取樣品0.15 g，置于50 mL量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 mL至10 mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，0.45 μm的微孔薄膜濾過，即得。
2.2.3空白溶液的`制備
將不含被分析成分的鹽酸溴己新輔料混合均勻后，精密稱取93.9 mg到50 mL容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
圖1HPLC圖譜 略
2.3線性關(guān)系考察
分別精密吸取對(duì)照品溶液4、8、10、16、20 μL,進(jìn)樣測定峰面積。以色譜峰峰面積(A)為縱坐標(biāo),對(duì)照品進(jìn)樣量(m)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸,得回歸方程：A=27 251m-120 995(r=0.999 9，n=5)，結(jié)果表明,鹽酸溴己新的進(jìn)樣量在66.0～96.4 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,線性范圍是33.92～169.6 μg·mL-1。
2.4精密度試驗(yàn)
取同一對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次20 μL，測定峰面積，結(jié)果峰面積的RSD為0.59%，表明精密度良好。
2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)
取同一供試品溶液，分別于制備后0、2、4、8、12、16、24 h進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，峰面積的RSD為0.71%。說明鹽酸溴己新樣品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。
2.6重復(fù)性試驗(yàn)
分別取同一批供試品,按“2.2.2”項(xiàng)下方法重復(fù)制備樣品6份,并按以上色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算得鹽酸溴己新含量分別為99.92%、100.93%、100.12%、99.58%、99.50%、101.20%，RSD為0.70%，結(jié)果表明供試品制備方法重復(fù)性良好。
2.7回收率試驗(yàn)
取已知含量的樣品約0.05 g，共6份，精密稱定，分別精密加入鹽酸溴己新對(duì)照品18.00、18.40、20.10、20.90、21.90、22.90 mg，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。
表1鹽酸溴己新回收率試驗(yàn)結(jié)果(略)
2.8樣品測定
分別精密稱取3批樣品, 按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備,按上述色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果見表2。
表2鹽酸溴己新片的含量測定結(jié)果(略)
3、討 論
3.1本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)鹽酸溴己新對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描(190～400 nm)，得到紫外吸收?qǐng)D，結(jié)果發(fā)現(xiàn)鹽酸溴己新在249 nm處有最大吸收峰，故選擇249 nm為檢測波長。
3.2實(shí)驗(yàn)中曾考察過甲醇?冰醋酸水溶液、乙腈?冰醋酸水溶液、甲醇?磷酸鹽緩沖液、乙腈?磷酸鹽緩沖液等不同的流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙腈?磷酸鹽緩沖液(0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液加0.2%三乙胺溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH為3.0)(體積比30∶70)為流動(dòng)相時(shí)，鹽酸溴己新的峰形好，賦形劑也不干擾其測定。本法測定鹽酸溴己新的含量，回收率高，呈良好線性，重復(fù)性良好，符合定量分析要求。
3.3同時(shí)對(duì)相同3批樣品按中國藥典[1]中的紫外分光光度法進(jìn)行測定,結(jié)果平均標(biāo)示量分別為101.3%、101.8%、98.6%,RSD分別為1.36%、1.82%、1.90%(n=6);與HPLC法的測定結(jié)果比較,2種方法之間差異沒有顯著性。
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