氣相色譜法測定佛山人參再造丸中龍腦的含量
【摘要】 目的 建立氣相色譜法測定佛山人參再造丸中龍腦含量的方法。方法 采用HP?5石英毛細(xì)管柱(5% phenyl methyl siloxane)(30.0 m×320 nm×0.25 μm),柱溫為110 ℃,進(jìn)樣口溫度為180 ℃,檢測器溫度為250 ℃, 載氣為氮?dú)�。結(jié)果 龍腦檢測質(zhì)量濃度在6.875～220.00 μg/mL (r=0.9999,n=6)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收率為98.59%(RSD=1.52%)。
【關(guān)鍵詞】 氣相色譜法;佛山人參再造丸;龍腦;含量測定
Abstract:Objective To establish a method for content determination of borneol in Foshanrenshenzaizao pills. Method The sample was analyzed on an HP?5 capillary column (5% phenyl methyl siloxane, 30.0 m×320 nm×0.25 μm) using nitrogen as carrier gas. The temperatures of the column, injector and detector were 110, 180 and 250 ℃, respectively.Result There was good linearity in the range of 6.88?220.00 μg/mL (r=0.9999, n=6). The average recovery and relative standard deviation of borneol were 98.58% and 1.52%, respectively. Conclusion This method is simple, accurate and reproducible for the quality control of Foshanrenshenzaizao pill.
Key words:gas chromatography; Foshanrenshenzaizao pill; borneol
佛山人參再造丸是由人參、人工牛黃、血竭、當(dāng)歸、冰片(合成龍腦)、大黃等組成的復(fù)方制劑，具有祛風(fēng)化淤、活血通絡(luò)的功效，用于中風(fēng)、步履艱難、口眼歪斜、手足痙攣、左癱右瘓、筋骨疼痛、半身不遂、言語不清[1]。處方中冰片(合成龍腦)是一味常用藥，具有散郁火、清熱、消腫等功效。冰片(合成龍腦)主要成分是互為異構(gòu)體的龍腦和異龍腦，其化學(xué)結(jié)構(gòu)無特征紫外吸收，因此薄層掃描法和氣相色譜法[2-4]是測定這類化合物較好方法。本文建立氣相色譜法測定佛山人參再造丸中龍腦的含量，方法簡便，雜質(zhì)無干擾，分離效果好，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為該制劑質(zhì)量控制的方法之一。
1、儀器與試藥
Agilent HP6890氣相色譜儀，HP Chemstatations工作站，F(xiàn)ID檢測器;CQ 250超聲波處理器(上海,功率250 W，頻率33 kHz)。
龍腦(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110881?200504),水楊酸甲酯(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：707?8702),佛山人參再造丸共10批(佛山馮了性藥業(yè)有限公司)，所用的其他試劑均為分析純。
2、方法與結(jié)果
2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
色譜柱為HP?5石英毛細(xì)管柱(5% phenyl methyl siloxane)(30.0 m×320 nm×0.25 μm),柱溫為110 ℃,進(jìn)樣口溫度為180 ℃,檢測器溫度為250 ℃,載氣為高純度氮?dú)?分流比為20∶1，在上述色譜條件下,龍腦、水楊酸甲酯(內(nèi)標(biāo))的理論塔板數(shù)均大于40 000。龍腦與水楊酸甲酯(內(nèi)標(biāo))的分離度大于2。
2.2溶液的制備
2.2.1內(nèi)標(biāo)溶液的制備精密稱取水楊酸甲酯適量, 置于1 000 mL容量瓶中，加入乙醇配制成濃度為0.130 0 mg/mL的溶液,搖勻,即得。
2.2.2對(duì)照品溶液制備精密稱取龍腦對(duì)照品適量，置于100 mL容量瓶中，加上述內(nèi)標(biāo)溶液溶解并稀釋至刻度，制成濃度為0.090 0 mg/mL的溶液,搖勻,即得。
2.2.3供試品溶液的制備取本品剪碎，取約2 g，精密稱定，加硅藻土2 g研碎，置于具塞錐形瓶中，精密加入上述內(nèi)標(biāo)溶液25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減少的重量，取續(xù)濾液，即得。
2.3測定方法
吸取對(duì)照品溶液按上述色譜條件注入氣相色譜儀，測定龍腦和水楊酸甲酯峰面積，計(jì)算校正因子;吸取供試品溶液按上述色譜條件注入氣相色譜儀，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算即得。
2.4線性關(guān)系考察
精密稱取龍腦對(duì)照品適量，加上述內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為220.00 μg/mL龍腦對(duì)照品溶液;精密吸取該對(duì)照品溶液5 mL置于10 mL的容量瓶中，加上述內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為110.00 μg/mL龍腦對(duì)照品溶液;同上逐級(jí)用內(nèi)標(biāo)液稀釋配制6個(gè)不同濃度梯度220.00、110.00、55.00、27.50、13.75、6.875 μg/mL的對(duì)照品溶液。吸取上述溶液,按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄其峰面積,并以龍腦質(zhì)量濃度(ρ)為橫坐標(biāo),龍腦峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比(A)為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,得回歸方程A=0.012 4ρ-0.015 1(r=0.999 9,n=6)。結(jié)果表明龍腦檢測質(zhì)量濃度在6.875～220.00 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.5陰性干擾的考察
取缺冰片的處方，按工藝制成陰性制劑，按“2.2.3”項(xiàng)方法加乙醇超聲提取制得陰性對(duì)照溶液。分別吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液按上述色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果表明其他味藥及輔料對(duì)龍腦測定無干擾,見圖1。
圖1氣相色譜圖 略
2.6儀器精密度試驗(yàn)
取同一供試品溶液(批號(hào)為GC0007)按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測定龍腦的`含量,結(jié)果龍腦含量的RSD為1.02%，表明儀器精密度良好。
2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)
取同一供試品溶液，按上述色譜條件分別于0、1、2、4、6、8 h進(jìn)樣測定，計(jì)算龍腦峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比的RSD為1.69%。結(jié)果表明供試品溶液在8 h之內(nèi)穩(wěn)定。
2.8重復(fù)性試驗(yàn)
精密稱取同一批號(hào)(批號(hào)為GC0007)的樣品5份各2 g，按“2.2.3”項(xiàng)方法制得供試品溶液，測定每一份供試品含量，結(jié)果平均值為0.5972 mg/g,RSD=1.09%。結(jié)果表明本法重復(fù)性良好。
2.9加樣回收率試驗(yàn)
取已測得含量的樣品(批號(hào)為GC0007，龍腦質(zhì)量比為0.597 2 mg/g)6份各1 g，精密稱定，分別加入硅藻土1 g,研碎，各精密加入龍腦對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度為0.6017 mg/mL)1 mL，按“2.2.3”項(xiàng)方法制得供試品溶液，測定，結(jié)果平均回收率為98.59%，RSD為1.52%。
2.10樣品測定
取10批樣品，分別按供試品的溶液制備方法制得供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)測定，結(jié)果見表1。
表110批樣品測定結(jié)果 略
3、討 論
3.1參考文獻(xiàn)[2-4]提取溶劑選擇有乙醇、乙酸乙酯和氯仿等，內(nèi)標(biāo)物的選擇有萘和水楊酸甲酯。通過試驗(yàn)比較,加硅藻土研碎，乙醇為提取溶劑，超聲提取(功率250 W，頻率33 kHz)，水楊酸甲酯為內(nèi)標(biāo)物，龍腦提取率明顯提高，乙醇的毒性、刺激性較小、價(jià)格較低且水楊酸甲酯與龍腦都具有良好的分離度,故采用乙醇為提取溶劑、超聲提取和水楊酸甲酯為內(nèi)標(biāo)物的方法。
3.2采用超聲提取法，試用不同的提取時(shí)間(20 min、30 min、40 min)對(duì)樣品進(jìn)行提取，結(jié)果30 min與40 min樣品的含量較大而且無明顯差別，說明乙醇30 min的超聲提取樣品已經(jīng)提取完全，為節(jié)約時(shí)間及節(jié)省成本，超聲提取時(shí)間確定為30 min。
【參考文獻(xiàn)】
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