- 相關(guān)推薦
天蒼顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
摘要】目的 建立天蒼顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用薄層色譜法對(duì)方中當(dāng)歸、白芷、天麻、蒼術(shù)進(jìn)行定性鑒別;采用高效液相色譜法對(duì)方中的2，3，5，4′ -四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進(jìn)行含量測(cè)定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-水(13﹕87)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm。結(jié)果 通過(guò)薄層色譜可鑒別出方中成分。2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量測(cè)定線(xiàn)性范圍為0.1132～1.132μg;平均回收率為99.60%;RSD值為1.2%。結(jié)論 定性鑒別和含量測(cè)定方法準(zhǔn)確可行，重復(fù)性好，可有效地控制天蒼顆粒的質(zhì)量。
【關(guān)鍵詞】天蒼顆粒 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷 高效液相色譜法
天蒼顆粒由制何首烏、當(dāng)歸、白芷等藥組成，具有溫經(jīng)散寒，除濕止痛，舒筋壯骨的功能。適用于跌打損傷、筋骨酸痛，各類(lèi)關(guān)節(jié)炎、滑膜炎等各類(lèi)骨病。但其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并不完善，故需要深入研究。本文利用TLC法和HPLC法進(jìn)行相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)研究，從而提高完善天蒼顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
1 儀器和試藥
LC- 10ATVP高效液相色譜儀(日本島津公司)，SPD-10AVP紫外檢測(cè)器(日本島津公司)，KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);硅膠G薄層板(青島海洋化工廠(chǎng));2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品(0844-200003)，當(dāng)歸對(duì)照藥材 (120927-200411)，白芷對(duì)照藥材(120945-200707)，天麻對(duì)照藥材(120944-200006)，天麻素對(duì)照品 (110807-200205)，蒼術(shù)對(duì)照藥材(120970-200403)均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。乙腈為色譜純，水為純化水，其他所用試劑均為分析純。天蒼顆粒樣品(批號(hào)：20101101，20101102，20101103)。
2 薄層鑒別
2.1 當(dāng)歸: 取本品5g，研細(xì)，加乙醚50ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右颐?ml使溶解，另取當(dāng)歸對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取缺失當(dāng)歸的陰性樣品5g，同供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照液。照薄層色譜法[1](中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(4﹕1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。(見(jiàn)圖1)
2.2 天麻: 取本品5g，研細(xì)，加70%甲醇50ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?0%甲醇5ml使溶解，作為供試品溶液。另取天麻對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取天麻素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。再取缺失天麻的陰性樣品5g，同供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照液。照薄層色譜法[1](中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，分別吸取上述供試品溶液和陰性對(duì)照溶液10μl，對(duì)照藥材及對(duì)照品溶液各5μl，點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲醇-水(9：1：0.2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，在 105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，有相同顏色斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。(見(jiàn)圖2)
3 含量測(cè)定
3.1 色譜條件：色譜柱Agilent ODS Cl8(5m，150 mm×4.6mm);以乙腈-水(13﹕87)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm，柱溫 35℃，流速1.0ml/min，理論塔板數(shù)按2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
3.2 樣品的制備
3.2.1 對(duì)照品溶液的制備：取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，置棕色瓶中加稀乙醇制成每1ml含25μg的溶液，即得。
3.2.2 供試品溶液的制備：取裝量差異下的本品內(nèi)容物，混勻，取適量，研細(xì)，取約1.0g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，稱(chēng)重，超聲處理(功率250W，頻率30KHz)30分鐘，取出，放冷，再稱(chēng)定重量,用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，濾液經(jīng)微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，慮液置棕色瓶中備用。
3.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備取處方除何首烏的全部藥味，按成品工藝及供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。
3.3 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)
3.3.1 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn)：分別精密吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各20μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件檢測(cè)，在待測(cè)成分保留時(shí)間處，陰性對(duì)照無(wú)其他成分干擾，結(jié)果表明，測(cè)定方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖4。
3.3.2 線(xiàn)性關(guān)系考察：分別精密吸取對(duì)照品1、2、4、6、8、10μL溶液， 注入液相色譜儀中，測(cè)定色譜峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，經(jīng)線(xiàn)性回歸，回歸方程為：Y=1248068X-5646.25，r=0.9998。2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進(jìn)樣量在0.1132～1.132μg范圍內(nèi)，呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。
3.3.3 精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣，連續(xù)測(cè)定6次，記錄峰面積，RSD值2.13%，表明精密度良好，符合含量測(cè)定要求。
3.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份供試品溶液，分別在制備后0，2，6，12，24 h后依法測(cè)定連翹苷的峰面積，結(jié)果2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面積RSD為0.73% ，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。
3.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)：取同批樣品，依法平行制備6份，分別測(cè)定2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，RSD值為1.03%，結(jié)果表明供試品制備方法重復(fù)性良好，符合含量測(cè)定要求。
3.3.6 回收率試驗(yàn)：取已知含量的樣品6份，每份約0.5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中再分別加入2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品適量，按供試品溶液的制備項(xiàng)下操作，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果
3.3.7 樣品測(cè)定：分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照液各10μl，注入液相色譜儀中，測(cè)定，即得。結(jié)果見(jiàn)表2
表2 三批樣品含量測(cè)定結(jié)果
4 討論
4.1 2，3，5，4′ -四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷為何首烏的主要有效成分，參考有關(guān)文獻(xiàn) ，經(jīng)研究對(duì)比，建立了2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O- β-D-葡萄糖苷的含量測(cè)定法，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，本法重現(xiàn)性好、陰性對(duì)照無(wú)干擾，操作簡(jiǎn)單，便于滿(mǎn)足工業(yè)化生產(chǎn)的需要，可有效控制本品的質(zhì)量，為保證用藥的有效性提供技術(shù)支持。
4.2 色譜條件的選擇依據(jù)本文先后考察了甲醇-水、乙腈-甲醇-水，參照相關(guān)文獻(xiàn)[2-4]最后采用乙腈-水(13﹕87)作為流動(dòng)相測(cè)定連翹苷的含量，檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm，流速為1ml/min。理論塔板數(shù)不低于3000，主峰與其他雜質(zhì)峰分離度大于 1.5，符合要求。
參 考 文 獻(xiàn)
[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[s].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.
[2]陳彥清，張輝等.高效液相色普法測(cè)定潤(rùn)燥通便合劑中二苯乙烯苷含量[J].中國(guó)健康月刊，2011，30(4):391
[3]謝國(guó)芳，高敏，張利等. HPLC測(cè)定定益腦寧片中二苯乙烯苷的含量[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥，2010，30(4):86-87
[4]廖海民，胡正海，賀定翔.制首烏中二苯乙烯苷含量的HPLC測(cè)定[J].西北藥學(xué)雜志，2006，21(1)：3—4.
【天蒼顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究】相關(guān)文章：
喉疾靈口含片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究06-14
中藥免煎顆粒與傳統(tǒng)水煎劑銀翹散臨床療效分析05-08
課題研究開(kāi)題報(bào)告10-26
定向增發(fā)機(jī)制研究06-03
刑罰裁量的原則研究06-04
文學(xué)鑒賞研究論文11-03
單位自首的處罰研究06-13
舞蹈藝術(shù)的特征研究10-26