- 相關推薦
葫蘆茶根中總多酚提取富集工藝研究
【摘要】 目的優(yōu)選葫蘆茶根中總多酚提取富集工藝。方法以總多酚含量為考察指標，采用單因素實驗和正交實驗結合的方法優(yōu)選葫蘆茶根中總多酚的提取工藝，并優(yōu)選D101型大孔樹脂富集葫蘆茶根中總多酚的最優(yōu)條件。結果優(yōu)化條件結合工業(yè)生產(chǎn)實際，確定其最佳提取工藝條件為30℃，50%丙酮，8倍量溶劑提取3次，4.5 h/次，此條件下總多酚收率大于6%。以D101型大孔樹脂對總多酚進行富集，最佳工藝條件為2 BV/h流速，收集6 BV 30%乙醇洗脫液，總多酚含量為77.2%，收率為32.3%。結論 該法能有效提取富集葫蘆茶根中總多酚。
【關鍵詞】 葫蘆茶; 總多酚; 提取; 富集; 正交設計
葫蘆茶系豆科葫蘆茶屬植物葫蘆茶Tadehagi triquetrum (L.) Ohashi的全草，為民間常用中草藥，主產(chǎn)于廣西、江西、廣東、福建等地[1，2]。本品性涼，味微苦、澀，具有清熱解毒、消積利濕、殺蟲防腐等功效，臨床用于預防中暑，治療感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、急性腎炎、黃疸肝炎、腸炎、細菌性痢疾、妊娠嘔吐等[3]。目前對該植物的化學成分和生物活性的研究已有報道[4~6]，發(fā)現(xiàn)其具有抑菌和殺滅椎實螺的作用。我們在研究中發(fā)現(xiàn)葫蘆茶根中多酚類成分具有較強的殺軟體動物作用，因此我們對其富含的多酚類成分的提取和富集工藝進行了考察，旨在提高總多酚的收率，為其綜合開發(fā)利用奠定基礎。
1 儀器與試藥
Unico7200可見分光光度計(尤尼柯上海儀器有限公司);Laborata 4000型旋轉蒸發(fā)儀(Heidolph公司); BP210S十萬分之一電子天平(Sartorius公司);V-560紫外可見分光光度計(Jasco公司) 葫蘆茶全草，2006-03采集于廣西壯族自治區(qū)平南縣，經(jīng)遼寧師范大學陳辰教授鑒定為Tadehagi triquetrum (L.) Ohashi;沒食子酸(南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司，批號：ZL20090403YG，純度99.68%);D101型大孔吸附樹脂(天津海光化工有限公司);所用試劑均為分析純;實驗用水為蒸餾水。
2 方法與結果
2.1 總多酚含量測定方法[7~9]
2.1.1 標準曲線的繪制精確稱取干燥至恒重的沒食子酸對照品10 mg，置于100 ml棕色容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取25 ml，置于100 ml棕色容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為0.025 mg/ml的對照品溶液。分別精確吸取沒食子酸對照品溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0和2.5ml置于10 ml棕色容量瓶中，各加水至5 ml，再分別加入Folin試劑1 ml，用29% Na2CO3溶液稀釋至刻度，搖勻，以相應的試劑為空白，30 min后，在754 nm波長下測定吸光度值，以吸光度值為縱坐標，濃度(mg/ml)為橫坐標，繪制標準曲線。得回歸方程C=3.023A + 0.0405(r=0.999 5)，其線性范圍為0.002 5～0.012 5 mg/ml。
2.1.2 樣品溶液的測定準確稱取30.0 g粉碎后葫蘆茶根，置于500 ml的圓底燒瓶中，按實驗設置的處理條件提取，回收溶劑后冷凍干燥，準確稱取待測樣品50 mg，用水溶解，置于100 ml 的容量瓶中并定容。搖勻，精密量取10 ml置于100 ml的棕色容量瓶中定容，搖勻，準確量取2 ml于10 ml棕色容量瓶中，按“2.1.1”項下自“各加水至5 ml”起，同法測定吸光度，計算總多酚的含量和收率。
2.2 葫蘆茶根中總多酚提取工藝優(yōu)選[10，11]
2.2.1 因素與水平 首先對溶媒濃度、提取溫度、提取時間、料液比和提取次數(shù)進行了單因素實驗，確定了各因素最佳條件分別為：60%丙酮，40℃，6 h，1∶8和3次。對各因素進行綜合分析，固定提取次數(shù)3次，對溫度(A)，溶媒濃度(B)，提取時間(C)，料液比(D)進行考察，以總多酚含量為考核指標，按4因素3水平進行L9(34)正交實驗。各因素水平安排見表1表1 考察因素及水平水平A溫度T/℃B溶媒濃度(%)
2.2.2 正交實驗設計及結果 按L9(34)正交設計表安排實驗，正交設計及實驗結果見表2。由表2分析結果可知，在葫蘆茶總多酚的提取工藝中，各因素對提取效果的影響程度依次為A>B>C>D，最優(yōu)水平組合為A1B1C1D2，即最佳提取工藝為8倍量50%丙酮，30 ℃提取3次，4.5 h/次。
2.2.3 驗證實驗精確稱取粉碎后葫蘆茶根30.0 g(平行6份)，置于500 ml的圓底燒瓶中，加入8倍量50%丙酮，30 ℃提取4.5 h，提取3次�；厥杖軇┖罄鋬龈稍�。按“2.1.2”項下操作在754nm波長下測定吸光度。6次測定結果，總多酚平均含量為27.34%，總多酚平均收率為6.26%。結果表明確定的工藝條件優(yōu)于正交實驗中的任何一組，且重復性較好，說明確定的工藝合理。
2.3 葫蘆茶根中總多酚富集工藝優(yōu)選[12]
2.3.1 D101型大孔吸附樹脂的預處理取一定量的D101大孔樹脂，95%乙醇浸泡24 h，將其裝入樹脂柱內，先以95%乙醇洗至流出液中加3倍量水后無白色混濁現(xiàn)象，改用蒸餾水沖洗至無醇味，備用。表2 正交設計及實驗結果 2.3.2 靜態(tài)吸附量的確定在250 ml的錐形瓶中加入5 g預處理后的D101大孔吸附樹脂以及100 ml樣品溶液(濃度為9.36 mg/ml)。室溫條件下振蕩24 h，取上清液測定總多酚含量。計算物料平衡吸附量：q = (C0-C)V/G，式中C0和C分別是初始和平衡時溶液中總多酚的濃度(mg/ml)，V為供試品液的體積(ml)，G為樹脂量(g)。計算得D101樹脂對多酚的靜態(tài)吸附量為27.82 mg/g。
2.3.3 動態(tài)吸附量的確定取30 g預處理后D101大孔樹脂裝入內徑為2.5 cm的樹脂柱，取濃度為10.33 mg/ml的葫蘆茶根50%丙酮提取液，以2BV/h的流速連續(xù)通過樹脂柱，收集流出液，每30 ml收集1個洗脫餾分，測定每個洗脫餾分中總多酚濃度。結果表明，當上柱樣品溶液加至300 ml時，D101大孔樹脂吸附達到飽和。
2.3.4 D101樹脂洗脫條件的選擇洗脫劑濃度的考察：取30 g經(jīng)預處理后的D101大孔吸附樹脂裝柱，取5 g葫蘆茶根50%丙酮提取物，用水溶解，過濾，以2 BV/h的流速上柱，吸附完全后用蒸餾水及10%，30%，50%，95%乙醇，以2BV/h流速進行洗脫，收集每個梯度洗脫液，濃縮干燥并進行含量測定。結果見表3。結果表明，10%和30%乙醇洗脫液中總多酚含量高，收率為33.0%，所以選擇用水及30%乙醇進行洗脫。表3 洗脫劑濃度對洗脫量的影響洗脫劑洗脫量m/mg總多酚含量(%)收率(%) 洗脫劑用量的確定：分別用水、30%乙醇對已飽和吸附的D101大孔吸附樹脂(柱體積為30 ml)進行洗脫，分別用去離子水5個柱體積，30%乙醇8個柱體積進行洗脫，測定每個洗脫體積中多酚的含量。結果見表4從表4可以看出，水洗脫過程中從第2個柱體積開始洗脫液中總多酚的含量大于50%，30%乙醇洗脫過程中從第7個柱體積開始洗脫液中總多酚的含量小于70%，為富集葫蘆茶根中多酚，所以選用1BV的水洗脫后用6BV的30%乙醇洗脫采用洗脫條件為1BV的水洗脫，6BV的30%乙醇洗脫，洗脫流速為2BV/h，葫蘆茶根中總多酚富集在30%乙醇洗脫液部分，富集物中總多酚含量為77.2%，收率為32.3%。表4 洗脫劑用量的影響水洗脫洗脫體積編號多酚含量(%)
3 討論
在對葫蘆茶根殺軟體動物實驗中發(fā)現(xiàn)其具有較強的殺軟體動物作用，經(jīng)化學成分分析發(fā)現(xiàn)其富含多酚類成分[9]，因此我們對葫蘆茶根中富含的多酚類成分的提取和富集工藝進行了優(yōu)化。確定了最佳提取工藝條件為30℃，50%丙酮，8倍溶劑提取3次，4.5 h/次，此條件下總多酚收率大于6%。以D101型大孔樹脂對總多酚進行富集，最佳工藝條件為2 BV/h流速，收集6 BV 30%乙醇洗脫液，總多酚含量為77.2%，收率為32.3%。D101樹脂對葫蘆茶多酚的吸附容量大，吸附性能穩(wěn)定，吸附柱可按比例放大用于工業(yè)富集葫蘆茶多酚。
【參考文獻】
[1] 中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志[M].北京:科學出版社,1995.
[2] 江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典(下冊)[M].上海:上�？茖W技術出版社,1985.
[3] 全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編(上冊)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000.
[4] 文東旭,鄭學忠,史劍俠,等.葫蘆茶化學成分的研究(Ⅰ) [J].中草藥,1999,30(4):252.
[5] 文東旭,陸敏儀,唐人九,等.葫蘆茶化學成分的研究(Ⅱ) [J].中草藥,2000,31(1):3.
[6] 李樹榮,李琦華,張 菁,等.葫蘆茶對椎實螺的殺滅實驗[J].中獸醫(yī)學雜志,2003，1:3.
[7] 國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部[S].北京：化學工業(yè)出版社，2005.
[8] 吳小娟,林紅景,唐 玲,等.山茶種子抗骨質疏松有效部位群化學成分的含量測定[J].中南藥學,2007,5(2): 107.
[9] 史麗穎,于大永,馮寶民,等. 葫蘆茶根和葉中化學成分定量分析[J]. 中草藥, 2009, 40(增刊): 289.
[10] 趙子劍,連 琰,陳迪釗. 正交實驗優(yōu)選魚腥草總黃酮提取工藝研究[J].時珍國醫(yī)國藥, 2008,19(10):2389.
[11] 吳國宏,熊何健. 荔枝葉中多酚類物質的提取制備[J].食品科學,2007,28(6):131.
[12] 劉 欣,高月娟,王建明,等. 大孔吸附樹脂對丁香葉中丁香苦苷的富集工藝研究[J].中草藥, 2008,39(11):1655.
【葫蘆茶根中總多酚提取富集工藝研究】相關文章：
蒺藜總黃酮提取工藝的研究02-28
關于滲漉法提取白芷總香豆素的工藝研究03-18
消痤飲提取工藝的研究03-29
研究菊花揮發(fā)油提取工藝03-18
研究復方癌痛平膠囊的提取工藝03-20
三仙壯骨膠囊提取工藝研究12-11
五味子果膠提取工藝研究11-14
正交設計法研究人參皂苷的最佳提取工藝03-18