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龍血竭中龍血素A在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究
【摘要】 目的 考察龍血竭中龍血素A在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)行為。方法 按100 g大鼠給予龍血竭250 mg灌胃給藥，測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度，并以3P97軟件計(jì)算其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果 龍血素A 的Ka為(1?46±0.19) h-1，t1/2(Ka)為(0.48±0.06) h，t1/2(K)為(2.59±0.67) h，tmax為(2.00±0.55) h，Cmax為(1.13±0.24) μg·mL-1，AUC為(2.84±0.68) μg·h·mL-1。結(jié)論 龍血素A在大鼠體內(nèi)符合線性動(dòng)力學(xué)一室開放模型，吸收較快。
【關(guān)鍵詞】 龍血竭;龍血素A;高效液相色譜法;大鼠;藥動(dòng)學(xué)
Abstract:ObjectiveTo study on pharmacokinetics of loureirin A in rats.Methods The blood samples were collected at a series of time points after an oral administration of Dragon′s blood to rats (2.5 g·kg-1),and were analyzed by HPLC.Pharmacokinetic parameters were valuated by 3P97 software. Results Pharmacokinetic parameters of loureirin A were as follows:Ka (1.46±0.19) h-1,t1/2(Ka) (0.48±0?06) h,t1/2(K) (2.59±0.67) h,tmax (2.00±0.55) h,Cmax (1.13±0.24) μg·mL-1,AUC (2.84±0.68) μg·h·mL-1.Conclusion The results demonstrated that the pharmacokinetics of loureirin A was consistent with one-compartment model,which was absorbed and distributed rapidly in rats.
Key words: Dragon′s blood;loureirin A;HPLC;pharmacokinetics
血竭(Dragon′s blood) 又名麒麟竭，是傳統(tǒng)名貴中藥。國(guó)產(chǎn)血竭稱龍血竭，具有祛瘀定痛、止血生肌的功效[1]，被譽(yù)為“活血圣藥”，臨床應(yīng)用廣泛。龍血竭的主要成分為黃酮類化合物,其在治療冠心病、腦梗死、心肌缺血、腦缺血損傷等方面有顯著療效[2-3]。龍血素A是龍血竭黃酮的主要成分之一，目前未見關(guān)于龍血素A體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的文獻(xiàn)報(bào)道。本文采用HPLC法[4]測(cè)定龍血素A在大鼠體內(nèi)的血藥濃度，研究龍血素A在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
1儀器與材料
1.1動(dòng)物
SD大鼠66只，體質(zhì)量(250±20)g，雌雄兼?zhèn)�，由中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：(粵)2006A064。
1.2儀器
Waters高效液相色譜儀：515 HPLC泵，2487雙波長(zhǎng)吸收監(jiān)測(cè)器，N-2000雙通道色譜工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所);TDL80-2B臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);SCQ5201超聲儀(上海超聲波儀器廠);ZH-2 BLENDER渦旋混合器(天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠)。
1.3材料
廣西產(chǎn)龍血竭(廣西中醫(yī)學(xué)院制藥廠提供);龍血素A對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：200402);乙腈、甲醇(色譜純)，乙酸乙酯、無(wú)水乙醇、冰醋酸(分析純)。
2方法與結(jié)果
2.1色譜條件
色譜柱：Diamonsil C18(5 μm，250 mm×4.6 mm);保護(hù)柱：Easyguard C18 Replacement CartridgesCat#6101;流動(dòng)相：乙腈-體積分?jǐn)?shù)1%冰醋酸(體積比35∶65);檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm;流速：1.2 mL·min-1，柱溫:25 ℃;進(jìn)樣量:20 μL。
2.2血樣的采集和處理
大鼠禁食(自由飲水)12 h后，按100 g大鼠給予龍血竭250 mg，灌胃給藥。分別在第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10 h于頸動(dòng)脈取血,置于用肝素預(yù)處理過的離心管中。取全血1 mL置離心管中，加入乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL，渦旋混合均勻，3 000 r·min-1離心10 min，取上清液，提取3次，合并上清液，50 ℃水浴揮干，于殘?jiān)屑尤?00 μL甲醇，超聲處理使之溶解，12 000 r·min-1離心10 min，取上清液作為樣品，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖與峰面積，采用外標(biāo)法定量。
2.3方法學(xué)考察[3]
2.3.1龍血素A對(duì)照品貯備液的制備取龍血素A對(duì)照品，用甲醇配制成每1 mL約含100 μg的溶液，作為對(duì)照品貯備液。
2.3.2方法專屬性取大鼠2只，實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，自由飲水，1只做空白對(duì)照，1只按100 g給予龍血竭250 mg灌胃給藥，給藥2 h后取血樣，按“2.2”項(xiàng)下方法操作測(cè)定。由圖1可見，全血中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾龍血素A的測(cè)定，表明本方法有較好的專屬性。[PSD261;S*2〗A.空白血漿; B.空白血漿+對(duì)照品; C.樣品圖1 HPLC圖譜Figure 1HPLC chromatograms
2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線與最低檢測(cè)限取空白全血適量，精密加入龍血素A對(duì)照品儲(chǔ)備液，配制質(zhì)量濃度為0.076、0.151、0.302、0.605、1.209、2.418、4.836 μg·mL-1的系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“2.2”項(xiàng)下的方法，自“加乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL”起，依法操作，記錄峰面積。以質(zhì)量濃度(ρ)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，結(jié)果表明龍血素A的質(zhì)量濃度在0.076～4.836 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，回歸方程為：A=49679ρ+2784.3，r=0.998 3(n=7)。取標(biāo)準(zhǔn)曲線用溶液，逐步稀釋至溶液中龍血素A的響應(yīng)值約為基線噪音的3倍(S/N=3)，記錄色譜圖，得出最低檢測(cè)限(LOD)為0.025 μg·mL-1。
2.3.4相對(duì)回收率與精密度精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液，以空白全血分別配成高、中、低3種質(zhì)量濃度(4.836、1.209、0.076 μg·mL-1)的樣品溶液，按 “2.2” 項(xiàng)下的方法，自 “加乙腈2 mL、 乙酸乙酯 1 mL”起，依法操作。記錄峰面積并代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各樣品濃度，計(jì)算相對(duì)回收率。結(jié)果表明，高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的樣品的相對(duì)回收率均高于80%。見表1。
取以上高、中、低3個(gè)質(zhì)量濃度的樣品溶液于同一天內(nèi)連續(xù)測(cè)定3次，計(jì)算日內(nèi)RSD;每天測(cè)定3種濃度樣品各1次，連續(xù)測(cè)定3 d，計(jì)算日間精密度RSD。結(jié)果日內(nèi)和日間精密度RSD值均小于10%，表明該法精密度較好。見表1。
2.3.5樣品穩(wěn)定性精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液，以空白全血配制質(zhì)量濃度為0.076、0.605、1.209、2.418 μg·mL-1的樣品，分別考察室溫25 ℃放置0、4、12、24 h，-20 ℃冰箱放置24 h，-20 ℃下反復(fù)凍融3次的穩(wěn)定性。結(jié)果各樣品的RSD值均在2.76%～11.42%(n=6)之間，符合《中國(guó)藥典》相關(guān)規(guī)定，表明樣品穩(wěn)定性較好。表1龍血素的回收率與精密度
2.4大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)
取SD大鼠66只，禁食不禁水12 h后，按時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)分為11組，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6只，按100 g體質(zhì)量給予龍血竭250 mg灌胃給藥，采集不同時(shí)間點(diǎn)的血樣，按“2.2”項(xiàng)下方法處理樣品并測(cè)定龍血素A的濃度。
2.4.1血藥濃度曲線按不同時(shí)間點(diǎn)求算平均血藥質(zhì)量濃度，并繪制血藥質(zhì)量濃度—時(shí)間曲線，見圖2。由圖可見，血藥質(zhì)量濃度達(dá)峰時(shí)間為(2.0±0?55)h，峰質(zhì)量濃度為(1.13±0.24)μg·mL-1。[PSD262;S*2〗圖2 大鼠口服龍血竭(2.5 g·kg-1)后龍血素A平均血藥質(zhì)量濃度—時(shí)間曲線Figure 2Mean concentration-time curve of loureirin A in rats (n=6)
2.4.2藥動(dòng)學(xué)參數(shù)用藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)處理軟件3P97對(duì)所測(cè)得數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，所得藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表2。由表2可見，龍血素A在大鼠體內(nèi)符合一室模型。
3討論
3.1本文選取龍血竭主要成分之一的龍血素A作為指標(biāo)成分，對(duì)龍血素A在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)情況進(jìn)行了研究，為臨床用藥提供了依據(jù)。
3.2對(duì)SD大鼠一次性灌胃龍血竭(250 mg/100 g)后，取全血進(jìn)行處理后測(cè)定血藥濃度，根據(jù)AIC(Akaike′s information criterion)值最小原則，確定其符合一室吸收動(dòng)力學(xué)模型，吸收半衰期為0.48 h;消除半衰期為2.59 h。從本文得到的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，并結(jié)合文獻(xiàn)[6]數(shù)據(jù)推斷，龍血竭口服后吸收較快，且迅速向體內(nèi)各組織分布。表2大鼠口服龍血竭(2.5 g · kg-1)后藥動(dòng)學(xué)參數(shù)
【參考文獻(xiàn)】
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