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氣虛發(fā)熱證家兔皮膚、肺臟、脾臟的形態(tài)學變化
【摘要】 目的研究氣虛發(fā)熱證家兔的皮膚、肺臟、脾臟的形態(tài)學變化,探討氣虛發(fā)熱對皮膚、肺臟、脾臟的影響。方法 將家兔隨機分成2組，即正常組與氣虛發(fā)熱組，采用禁食不禁水和腹腔注射脂多糖(LPS)建立氣虛發(fā)熱模型，取皮膚、脾臟、肺臟組織制備石蠟組織切片，顯微鏡下觀察其形態(tài)學變化。結果 顯微鏡下觀察組織切片，與正常組相比，氣虛發(fā)熱組家兔肺臟局部有炎性細胞浸潤，脾臟局部組織有灶狀多核巨細胞浸潤并見肉芽腫性病變，皮膚表皮呈不規(guī)則皺縮，毛囊變短，毛孔頭數(shù)明顯減少。結論 氣虛發(fā)熱證家兔的皮膚、脾臟、肺臟與正常家兔比較存在組織形態(tài)學差異。
【關鍵詞】 氣虛發(fā)熱;皮膚;肺臟;脾臟;形態(tài)學
Abstract:ObjectiveTo investigate the morphologic changes in skin,lung and spleen of rabbits with syndrome of fever due to qi deficiency,and to explore the effect of syndrome of fever due to qi deficiency on skin,lung and spleen. Methods Rabbits were randomly divided into two groups,normal group and group of syndrome of fever due to qi deficiency. The syndrome of fever due to qi deficiency group was developed by administering LPS and fasting. Paraffin sections of skin,lung,and spleen were prepared after hematoxylin and eosin (HE) staining,and morphological changes were observed under light microscopy. Results Compared with the normal tissue sections from the control group,local inflammatory cell infiltration from lung tissue,infiltration of focal multinucleated giant cells and granulomatous lesion from spleen,and irregular wrinkling of epidermis,hair follicle shortening were observed in the groups of rabbits with syndrome of fever due to qi deficiency,with significant decreasing number of skin pore visible under light microscopy. Conclusion There were morphological differences in microscopic structures of skin,lung,and spleen between the healthy rabbits and those with syndrome of fever due to qi deficiency.
Key words:syndrome of fever due to qi deficiency; skin; lung; spleen; paraffin section
元·李東恒認為，脾為后天之本，氣血生化之源。飲食勞倦七情，皆傷脾胃，損及元氣之故。而脾胃虛弱日久，又常導致他臟不足而兼見多臟虛證。故氣虛先導致脾虛，脾虛是氣虛的本質[1]。氣虛病機的形成是由肺脾功能不足、失調所致，導致氣生無根，氣化無源，氣用不足，從而表現(xiàn)出氣虛的各種病機狀態(tài)[2]。氣虛證除有脾胃氣虛的一面，還有致熱的因素，氣虛發(fā)熱乃是氣虛、感邪二者綜合的病理反映[3]�？偟膩碚f，氣虛發(fā)熱是脾臟、肺臟的病理結果，皮膚是氣虛發(fā)熱的外在表現(xiàn)。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，脾虛證患者在胃腸道形態(tài)學、胃組織細胞內細胞器密度數(shù)量、細胞內能量代謝、胃腸道黏膜保護性屏障作用、消化系統(tǒng)功能、胃腸道激素水平、免疫功能及植物神經功能等方面均存在不同程度的異常[4]。從皮膚組織形態(tài)觀察目前主要是觀察表皮、 彈力纖維和膠原纖維[5-7]。本實驗從組織形態(tài)學方面進行研究，探討氣虛發(fā)熱對皮膚、肺臟、脾臟的影響，結果更直觀，對臨床用藥具有一定的指導意義。
1材料與方法
1.1動物
新西蘭兔4只，普通級，體質量1.8~2.2 kg，許可證號：SCXK(粵)2008-0020，購于廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心。
1.2試劑
脂多糖[lipopolysaccharides(LPS) 055∶B5，L2880，Sigma公司];無水乙醇(AR，天津市百世化工有限公司，批號：20081108);95%(φ)乙醇 (AR，天津市大茂化學試劑廠，批號：20080407);二甲苯(AR，天津市富宇精細化工有限公司，批號：20081106);甲醛溶液(天津市科盟化工工貿有限公司，批號：20080423);切片石蠟(中國上海標本模型廠，批號：20070912)。
1.3HE染色染色劑的制備[8]
1.3.1Mayer蘇木精染液配制方法蘇木素1 g，鋁明礬1 g，檸檬酸1 g，水合氯醛50 g，碘酸鈉200 mg，蒸餾水1 000 mL。先將蘇木素加入煮沸的蒸餾水內攪拌充分溶解后再依次加入鋁明礬和碘酸鈉至鋁明礬全部溶解，然后再加水合氯醛、檸檬酸加熱煮沸5 min,冷卻后過濾,隔日即可使用。
1.3.21%伊紅的配置方法取1 g伊紅，溶于99 mL蒸餾水中，即成1%(ρ)伊紅水溶液。
1.4儀器
EG 1160石蠟包埋機、RM 2255石蠟切片機、TEC-2500石蠟切片漂烘儀(均為德國LEICA產品);LKB 2188型超薄切片機(NOVA);倒置光學顯微鏡 (日本Olympus)。
1.5方法
1.5.1家兔氣虛發(fā)熱證模型的制備篩選體溫在38.5～39.5℃的正常家兔，隨機分為正常組與氣虛發(fā)熱組,每組各2只。氣虛發(fā)熱組家兔禁食1周，但不禁水，氣虛模型建立成功后，腹腔注射LPS 80 μg/kg建立家兔氣虛發(fā)熱模型(結果另文報道);正常組常規(guī)飼養(yǎng)。然后每隔0.5 h測1次體溫，連續(xù)監(jiān)測8 h。實驗過程中動態(tài)觀察家兔的活動情況和精神狀態(tài)。
1.5.2石蠟組織切片的制備根據(jù)立題切取相應的器官并進行組織切片、染色與觀察。
取材與固定→沖洗→脫水→透明→浸蠟→包埋→切片、展片、貼片和烤片→脫蠟→復水→染色→透明→封片→觀察與拍照。
2結果
2.1動物狀態(tài)
氣虛發(fā)熱組：在對氣虛發(fā)熱組家兔進行禁食不禁水飼養(yǎng)后，氣虛發(fā)熱組家兔出現(xiàn)懶動、蜷臥、喜擠堆取暖，體質量下降，爪甲色淡，毛發(fā)疏散，干枯無澤，腹部、頭部毛發(fā)呈塊狀脫落，活潑性差，易抓回籠，排便偶出現(xiàn)稀便現(xiàn)象。用體溫計測肛溫正常。注射LPS后2 h開始發(fā)熱，4 h后發(fā)熱更明顯，呼吸急促，眼結膜充血，耳廓潮紅，耳根部灼熱，食量減少;6 h后體溫繼續(xù)上升，出現(xiàn)氣喘，鼻煽，不食，精神萎頓，大部分家兔出現(xiàn)稀便現(xiàn)象。正常組：家兔活動良好，排便正常，毛發(fā)有光澤，長短一致，爪甲紅潤;體質量稍增;用體溫計測肛溫正常。
2.2臟器檢查
2.2.1肺臟正常組肺臟呈粉紅色，肺胸膜平坦光滑有光澤，肺小葉間質分明，觸摸柔軟，有彈性，無顆粒感，切面既不干燥亦不明顯濕潤，用手擠壓，有少量淋巴液、血液滲出。氣虛發(fā)熱組氣管和各級支氣管黏膜假復層柱狀纖毛上皮均有不同程度損傷，支氣管腔內有多少不等的分泌物，肺泡壁增厚，毛細血管充血，個別肺實質內有灶狀出血。
2.2.2脾臟正常組脾臟的切面、濾泡、小梁和紅髓清晰可見，濾泡只在45 ℃的視線下才能見到極細的顆粒;小梁呈灰白色，細條狀;紅髓組織略柔軟，用刀輕刮不脫落。氣虛發(fā)熱組脾臟質量平均之后較正常組輕，包膜肥厚皺縮，脾小梁紋理粗大而明顯。
2.3組織病理學切片觀察
2.3.1脾臟
見圖1，與正常組相比，氣虛發(fā)熱組家兔脾臟局部組織有灶狀多核巨細胞浸潤，并見肉芽腫性病變。
2.3.2肺臟
見圖2，正常組家兔肺組織結構正常,各級支氣管、 肺泡及肺間隔均未見明顯形態(tài)學改變，氣虛發(fā)熱組家兔肺局部組織有炎性細胞浸潤，部分出現(xiàn)組織結構模糊。
2.3.3皮膚
見圖3，與正常組相比，氣虛發(fā)熱組家兔皮膚表皮呈不規(guī)則皺縮，毛囊變短，毛孔頭數(shù)明顯減少。[PSa5971;S*2〗 圖1家兔脾臟病理切片圖(HE,200×)Figure 1Pathological section of spleen of the normal rabbitsand rabbits with syndrome of fever due to qi deficiency(HE,200×)[PSa5972;S*2〗圖2家兔肺組織病理切片圖(HE,200×)Figure 2Pathological section of lung of the normal rabbits and rabbits with syndrome of fever due to qi deficiency(HE,200×)[PSa5973〗圖3家兔皮膚病理學切片圖 (HE,200×)Figure 3Pathological section of skin of the normal rabbits and rabbits with syndrome of fever due to qi deficiency (HE,200×)
3討論
現(xiàn)代醫(yī)學研究表明，傳統(tǒng)中醫(yī)學的“脾”不僅僅是一個簡單的解剖學概念，而且是人體最大的淋巴網(wǎng)狀內皮系統(tǒng)[9]。脾氣虛與免疫低下存在一定的關系。本研究發(fā)現(xiàn)，氣虛發(fā)熱組脾臟的質量平均值均比正常組輕，形態(tài)體積縮小，質地變硬，說明氣虛發(fā)熱組的免疫能力較正常組低，與諸多文獻報道的結果相符合。對脾臟進行組織病理學檢查發(fā)現(xiàn)，氣虛發(fā)熱組家兔脾臟局部組織有灶狀多核巨細胞浸潤，并見肉芽腫性病變，而正常組組織結構正常。
中醫(yī)認為，肺主氣、司呼吸是肺最基本的生理功能[10]。李海榮等[11]總結對肺氣虛證病理形態(tài)學的研究中發(fā)現(xiàn)，肺氣虛者，肺組織間隙多有慢性炎癥細胞浸潤，小支氣管黏膜下、肺泡組織間均有顯著的小靜脈擴張，肺結構破壞。本實驗結果發(fā)現(xiàn)氣虛發(fā)熱組肺局部組織有炎性細胞浸潤，部分出現(xiàn)組織結構模糊，正常組各組織均無異常。
肺氣宣發(fā)則津液得以輸布，臟腑得以濡養(yǎng)而活，皮毛肌腠得潤而澤，腠理固密，護衛(wèi)御邪，司汗液排泄以維持體溫恒定。肺臟發(fā)生病變，則易導致皮膚的相應表現(xiàn)。正如《靈樞·經脈篇》曰：“手太陰肺經，氣絕則皮毛焦”。因此，肺氣虧虛，宣發(fā)失常，則水谷精微無法外達，表現(xiàn)為皮膚干燥，膚冷畏寒，毛發(fā)干枯不榮。肺與皮毛在生理、病理和治療上是密不可分的[12]。實驗發(fā)現(xiàn)，氣虛發(fā)熱組爪甲色淡，毛發(fā)疏散，干枯無澤，腹部、頭部毛發(fā)呈塊狀脫落，與“肺主皮毛”理論吻合。對皮膚進行組織形態(tài)學檢查，正常組組織結構均正常，而氣虛發(fā)熱組表皮呈不規(guī)則皺縮，毛囊變短，毛孔頭數(shù)明顯減少。
脾氣虛常導致其他臟器的氣虛。肺主氣，故脾氣虛容易先導致肺氣虛。肺外合皮毛，通過觀察皮毛可以推測肺臟的病變。本實驗從組織形態(tài)學的角度對氣虛發(fā)熱的皮膚、脾臟、肺臟進行研究，結果表明氣虛發(fā)熱證家兔的皮膚、脾臟、肺臟與正常家兔比較存在組織形態(tài)學差異，其研究結果直觀明確，對臨床研究具有一定的指導意義。
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