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中藥蛇膽的鑒別及質(zhì)量控制現(xiàn)狀
【摘要】 蛇膽是一味具有止咳平喘消炎功效的傳統(tǒng)中藥，近年來(lái)隨著蛇膽資源的縮減，市售蛇膽的偽品漸增。本文綜述蛇膽鑒別和質(zhì)量控制的現(xiàn)狀，展望今后研究的方向，為蛇膽的質(zhì)量控制提供有益的參考。
【關(guān)鍵詞】 蛇膽; 鑒別; 質(zhì)量控制
AbstractSnake gallbladder is a traditional Chinese medicine for treating cough,asthma,and inflammation,etc. More and more fakes appeared in the market as natural resources had kept decreasing in recent years. This article summarized the biological characteristic of snake gallbladder,and the latest progress in the study on identification and quality control,and its extensive application in basic research and clinical application were reviewed.
Key words:snake gallbladder; identification; quality control
蛇膽自古以來(lái)就是一味名貴藥材，廣泛應(yīng)用于臨床。蛇膽的藥用，最早見(jiàn)載于漢朝《名醫(yī)別錄》，當(dāng)時(shí)僅收載蚺蛇膽與蝮蛇膽2種[1]。2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》收載蛇膽的來(lái)源應(yīng)為眼鏡蛇科(Elapidae)、游蛇科(Megapodiidae)或蝰蛇科(Viperidae)多種動(dòng)物的膽。蛇膽性涼，味苦微甘，有行氣祛痰，祛風(fēng)去濕之功效，用于治療咳嗽多痰、目赤腫痛、皮膚熱毒、口眼生瘡、肺熱咳嗽、胃熱疼痛、肝熱目赤、急性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和痔瘡等。市場(chǎng)上含蛇膽的中藥制劑較多，常見(jiàn)的有蛇膽川貝散、蛇膽陳皮末、蛇膽追風(fēng)丸、蛇膽川貝枇杷膏等。
由于蛇膽具有獨(dú)特的藥用價(jià)值，加上市場(chǎng)需求量大，自然資源遞減，市場(chǎng)上蛇膽的偽品時(shí)有發(fā)現(xiàn)，已報(bào)道的摻假物有雞、鴨、魚(yú)、豬、牛等動(dòng)物膽汁和淀粉糊、青菜汁、明膠液、色素以及熟地黃提取液等[2]，以及油膽(用機(jī)油刺激蛇鼻腔或蛇體，使膽汁增多而質(zhì)差)或蜜膽或?qū)⑸吣懚啻谓荩侔焉吣懪c酒液分別出售使膽汁稀薄質(zhì)差[3-4]。因此，在藥用和收購(gòu)上，應(yīng)正確地鑒別各種蛇膽，從源頭上控制藥品質(zhì)量和保障用藥安全。多年來(lái)，國(guó)內(nèi)外研究者一直致力于運(yùn)用各種分析方法進(jìn)行蛇膽的質(zhì)量控制研究。本文將近年來(lái)蛇膽質(zhì)量控制的研究進(jìn)展綜述如下。
1蛇膽的鑒別現(xiàn)狀
1.1性狀鑒別
蛇膽的性狀鑒別是根據(jù)膽囊的外形特征、色澤、大小、質(zhì)地、膽蒂位置、膽管(形狀、長(zhǎng)度及韌性)、膽汁稠度、氣味等進(jìn)行比較的鑒別方法。蔣碧英[5]描述了正品蛇膽的性狀鑒別要點(diǎn);張穗[3]對(duì)14種蛇膽及其常見(jiàn)偽劣品進(jìn)行了外觀性狀鑒別。這種傳統(tǒng)手段簡(jiǎn)單方便，可直觀地將蛇膽與一般偽品區(qū)別開(kāi)來(lái)，在早期藥材收購(gòu)、加工部門(mén)的現(xiàn)場(chǎng)鑒定中較常使用;但由于蛇膽的形態(tài)學(xué)特征往往因加工方法和條件不同而變化，鑒別效果因人不同(經(jīng)驗(yàn)、主觀影響等)，因蛇而異(蛇的種類(lèi)、大小、生理狀態(tài)等)，因觀察環(huán)境(季節(jié)、光線等)而變化，誤差較大，現(xiàn)階段僅作為真?zhèn)舞b別的參考指標(biāo)。
1.2顯微鑒別
根據(jù)蛇膽的組織殘片、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征進(jìn)行顯微鑒別是蛇膽原藥材鑒別的方法之一。楊育民等[6]依據(jù)蛇膽內(nèi)含物的形狀、大小及顏色等顯微特征鑒別了蛇膽及其偽充品鑒別;陸惠文[7]根據(jù)蛇膽與偽品等各自的組織學(xué)特點(diǎn)將待檢膽囊標(biāo)本制成石蠟切片，經(jīng)HE染色和顯微觀察，鑒別了蛇膽(眼鏡蛇、金環(huán)蛇、灰鼠蛇等)與偽品蛇膽(雞膽、青魚(yú)膽等)。該法雖鑒別效果較好且簡(jiǎn)便，但僅適用于仍保留有顯微特征的原料藥材和成藥。由于膽的內(nèi)含物隨著蛇的生理狀態(tài)不同而有差異，組織學(xué)特征也因切片的取材位置不同而不同，因此增加了鑒別的難度;此外，目前大多數(shù)含蛇膽成藥不保留蛇膽的顯微特征，故此法不宜推廣。
1.3理化鑒別
蛇膽的主要成分有膽汁酸、膽色素、膽固醇、黏蛋白、無(wú)機(jī)鹽等，通常膽汁酸被認(rèn)為是其藥理作用的主要功效物質(zhì)。蛇膽膽汁酸主要為�；悄懰帷⑴；撬狴Z去氧膽酸、�；侨パ跄懰�、石膽酸、游離膽酸等，目前多以這些成分為指標(biāo)對(duì)蛇膽汁進(jìn)行質(zhì)量控制。
理化鑒別中常用的分析方法有化學(xué)分析法和薄層色譜法。蔣三員等[8]通過(guò)比較蛇、雞、鴨、魚(yú)膽汁的比黏度、鉀、鈉含量等鑒別了蛇膽。黎源等[9]對(duì)比了蛇膽汁和雞膽汁中的氨基酸及微量元素，發(fā)現(xiàn)蛇膽汁與雞膽汁均含有18種氨基酸，雞膽汁中除了�；撬岷柯缘陀谏吣懼�，其他氨基酸的種類(lèi)和含量非常相似;蛇膽汁中微量元素Ca、Mg、Fe、Zn、Cu的含量均略高于雞膽汁。黃曉文等[10]通過(guò)膽囊外觀性狀，膽汁的K2Cr2O7沉淀、糠醛-硫酸顯色反應(yīng)以及薄層色譜法(TLC)，鑒別了眼鏡蛇膽檢品，認(rèn)為該方法簡(jiǎn)單、專(zhuān)屬性強(qiáng)，可作為真?zhèn)紊吣懙蔫b別方法。植達(dá)詩(shī)[11]用糠醛-硫酸法鑒別了蛇膽及其偽品雞膽、鴨膽、魚(yú)膽等;鐘榮華[12]用糠醛-硫酸法成功鑒別了蛇膽、雞膽、鴨膽和黃鱔膽等，認(rèn)為該法結(jié)果可靠，簡(jiǎn)便易行，但不能鑒別蛇類(lèi)種屬。薄層層析法由于具備色譜分離特性，因此更適合分析復(fù)雜樣品。孫方人等[13]以�；悄懰釣閷�(duì)照用薄層層析法分析了眼鏡蛇蛇膽樣品并見(jiàn)到8個(gè)顯色斑點(diǎn);游勇基等[14]及唐元軍等[15]分別用TLC法鑒別了蟒蛇膽;薛漓[2]還用TLC法成功鑒別了蛇膽及特殊偽品——熟地黃提取液。此外，TLC法還被廣泛用于蛇膽復(fù)方制劑的鑒別研究。萬(wàn)京樺等[16]構(gòu)建了蛇膽川貝枇杷膏中蛇膽汁的TLC法鑒別方法;陳德球[17]用蛇膽汁及�；悄懰徕c作對(duì)照，采用TLC法鑒別蛇膽川貝液中的蛇膽;管玉民[18]用TLC法鑒別了蛇膽川貝液處方中的蛇膽汁;王倩等[19]用TLC法從蛇膽追風(fēng)丸中成功檢測(cè)出了蛇膽;蔣偉杰等[20]用TLC法從蛇膽菠蘿蛋白酶腸溶薄膜衣片中鑒別出了蛇膽。綜上所述，�；悄懰岬瘸煞譃閷�(duì)照用TLC法可有效鑒別出復(fù)方制劑中的蛇膽，但不能區(qū)別蛇膽的種屬來(lái)源。
1.4分子生物學(xué)鑒定
由于蛇膽保存和制劑加工過(guò)程中的處理方法往往破壞了蛇膽的完整性，因此依據(jù)性狀、顯微特征及理化性質(zhì)進(jìn)行鑒別有一定困難，分子生物學(xué)方法能克服上述問(wèn)題，呈現(xiàn)更客觀的結(jié)果。眾所周知，物種的多樣性是基因多態(tài)性的結(jié)果，而基因多態(tài)性可在分子水平上檢測(cè)，它比在形態(tài)、組織和化學(xué)水平上檢測(cè)更能代表其變異類(lèi)型的遺傳標(biāo)記。王義權(quán)等[21]將分子標(biāo)記技術(shù)運(yùn)用到蛇類(lèi)藥材的鑒定研究中，對(duì)游蛇科10種蛇基因組DNA的多態(tài)性進(jìn)行了分子遺傳標(biāo)記的研究;通過(guò)提取金錢(qián)白花蛇及其偽品藥材和原動(dòng)物樣品的模板DNA，分析其Cytb基因片斷鑒別了金錢(qián)白花蛇[22];沈曦等[23]通過(guò)比較12SrRNA和Cytb基因的部分序列鑒別了幾種蝮屬蛇類(lèi);劉向華等[24]從藥材蛇膽的膽衣和膽汁、原動(dòng)物棕黑錦蛇的肌肉和膽汁中提取DNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增12SrRNA基因片段，鑒別了蛇類(lèi)藥材。分子生物學(xué)鑒別方法雖能有效鑒別出蛇類(lèi)藥材的種屬來(lái)源，目前在蛇類(lèi)藥材的鑒別中應(yīng)用較廣，但由于市售蛇膽樣品的復(fù)雜性，蛇膽DNA的含量較低，故此法在蛇膽鑒別中的應(yīng)用較少，具體應(yīng)用方案還有待于進(jìn)一步完善。
2蛇膽及其制劑的含量測(cè)定
目前蛇膽藥材及其制劑中蛇膽的含量測(cè)定多以總膽酸或�；悄懰猁}為指標(biāo)，測(cè)定方法主要是紫外分光光度法、薄層掃描法(TLCS)和高效液相色譜法(HPLC)。梁意紅[25]、羅敏等[26]、曾常青等[27]先后采用TLCS法測(cè)定了蛇膽藥材中�；悄懰岬暮�;殷軍等[28]采用硫酸-糠醛法顯色法測(cè)定了蛇膽膽酸的含量;黃西峰等[29]用紫外分光光度法測(cè)定了蛇膽中總膽酸的含量;張丹等[30]和鐘然等[31]分別采用HPLC法測(cè)定蛇膽中牛黃膽酸的含量。溫金蓮等[32]用分光光度法測(cè)定了蛇膽糖漿口服液中膽酸的含量;孔廣英等[33]采用紫外分光光度法測(cè)定了牛黃蛇膽川貝液中的總膽酸含量;岑淑姬[34]和黎明[35]分別采用HPLC法和TLCS法測(cè)定蛇膽川貝液中�；悄懰岷�;金陽(yáng)[36]建立了蛇膽陳皮膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，采用TLC法鑒別了蛇膽，用HPLC法測(cè)定了�；悄懰徕c的含量;鄔威堯[37]采用TLCS法測(cè)定了蛇膽川貝散中牛磺膽酸的含量;吳兵兵[38]采用HPLC法比較了不同廠家蛇膽川貝膠囊中�；悄懰徕c的含量差異。由于蛇膽功效成分尚不明確，目前蛇膽含量測(cè)定所選擇的指標(biāo)專(zhuān)屬性不強(qiáng)，因此含蛇膽的中藥復(fù)方制劑牛黃蛇膽川貝液等的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)還有待于進(jìn)一步提高。
綜上所述，蛇膽的質(zhì)量控制研究雖歷史悠久，但由于技術(shù)方法的制約，目前各種方法均存在一定的缺陷，2010版藥典中亦缺乏較為全面的質(zhì)量控制方法。隨著研究手段的不斷進(jìn)步，運(yùn)用先進(jìn)的分子生物學(xué)手段，采用多種鑒別方法綜合驗(yàn)證、多指標(biāo)綜合控制，從而制定更完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是今后蛇膽質(zhì)量控制的必然趨勢(shì)。
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