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正交試驗(yàn)法優(yōu)選金芍膠囊的醇提工藝
【摘要】
【目的】對(duì)金芍膠囊的醇提工藝進(jìn)行優(yōu)選。【方法】以鹽酸小檗堿的含量和得膏率為考查指標(biāo),采用正交試驗(yàn)法對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)選�！窘Y(jié)果】與乙醇用量、提取次數(shù)相比，乙醇濃度對(duì)鹽酸小檗堿的提取影響較大,優(yōu)選出的最佳提取工藝為：采用為藥材8、6倍量的體積分?jǐn)?shù)70%乙醇分別回流提取2次,每次1 h�！窘Y(jié)論】該工藝鹽酸小檗堿提取率較高,有較好的穩(wěn)定性,且工藝簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì),適合于生產(chǎn)。
【關(guān)鍵詞】 金芍膠囊/化學(xué)；鹽酸小檗堿/分析；正交試驗(yàn)；色譜法，高壓液
Abstract: ObjectiveTo optimize the ethanol extraction process of Jinshao Capsules. MethodsThe content of berberine hydrochloride and the yield of extract were used for the indicators, and the orthogonal experiment was adopted for the optimization. ResultsThe concentration of the ethanol had stronger effect on the extraction than the other two factors of ethanol volume and extraction times. The optimized technology was A3B2C1. In other words, the optimized technology was as follows: reflowing extraction twice with 70% ethanol which was eight times first and then six times as much as the medical material, one hour each time. ConclusionThis process has higher extraction rate of berberine hydrochloride and has good stability, which is simple and economic, and is suitable for industrial production.
Key words: JINSHAO CAPSULES/analysis;BERBERINE HYDROCHLORIDE/analysis;ORTHOGONAL TEST;HIGH PRESSURE LIQUID,CHROMATOGRAPHY
金芍膠囊是廣州中醫(yī)藥大學(xué)新藥開發(fā)研究中心與廣東德鑫制藥有限公司合作開發(fā)的中藥6類新藥,主要由赤芍、當(dāng)歸、莪術(shù)、黃柏、延胡索、香附、菝葜、千斤拔等13味藥物組成。其功能為理氣化瘀止痛、燥濕健脾，用于治療氣滯血瘀所致婦女下腹脹痛或刺痛、腰骶酸痛、經(jīng)行加重、白帶異常等癥及慢性盆腔炎見上述癥候者。
本研究采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選金芍膠囊中黃柏、延胡索、莪術(shù)、蒼術(shù)、當(dāng)歸、香附等藥材的最佳醇提工藝。方中黃柏為抗菌消炎的主要藥物,鹽酸小檗堿為黃柏的主要有效成分之一［1］,因此以黃柏中鹽酸小檗堿含量和提取得膏率為指標(biāo),對(duì)金芍膠囊醇提工藝進(jìn)行優(yōu)選,為金芍膠囊生產(chǎn)工藝提供科學(xué)依據(jù),現(xiàn)報(bào)道如下。
1儀器與試劑
Agilent 1100高效液相色譜儀(HPLC,美國(guó)安捷倫科技公司),DAD檢測(cè)器,Agilent 1100 化學(xué)工作站；BP110 S電子天平(德國(guó)賽多利斯公司),CP225D電子天平(德國(guó)賽多利斯公司)；藥材均由廣東德鑫制藥有限公司提供；鹽酸小檗堿對(duì)照品(購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所提供,批號(hào)：110713?200609)；乙腈、甲醇為色譜純,其他試劑為分析純。
2方法與結(jié)果
2.1HPLC測(cè)定提取液中鹽酸小檗堿含量
2.1.1色譜條件［2］色譜柱：Kromasil C18 色譜柱 (4.6 mm×250 mm,5 μm),流動(dòng)相：乙腈—體積分?jǐn)?shù)0.1%磷酸溶液(50∶50)(每100 mL加十二烷基磺酸鈉0.1 g),流速：1.0 mL/min,進(jìn)樣量：10 μL,檢測(cè)波長(zhǎng)：265 nm。
2.1.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取在100℃干燥5 h的鹽酸小檗堿對(duì)照品13.73 mg,置50 mL量瓶中,加甲醇溶解定容至刻度,搖勻,作為對(duì)照品母液。精密量取對(duì)照品母液5.0 mL,置25 mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,過微孔濾膜,即得。
2.1.3黃柏藥材含量測(cè)定按文獻(xiàn)［2］方法測(cè)定,平行3份,測(cè)定結(jié)果為35.32、34.46、34.74 g/kg,平均含量為34.84 g/kg。
2.1.4供試品溶液的制備精密量取提取液5.0 mL,置25 mL量瓶中,加體積分?jǐn)?shù)70%乙醇稀釋至刻度,搖勻,過微孔濾膜,即得。
2.1.5缺黃柏陰性樣品溶液的制備取缺黃柏陰性提取液,按2.1.4項(xiàng)下方法制備,即得。
2.2計(jì)算方法
2.2.1得膏率精密量取提取液25 mL,置于恒質(zhì)量蒸發(fā)皿中,水浴蒸干,放入105℃的烘箱中,烘3 h,取出,置干燥器中,放置30 min,迅速稱定質(zhì)量,計(jì)算得膏率：w得膏＝(m干膏+蒸發(fā)皿-m蒸發(fā)皿)×V溶液總/(25×m藥材)。
2.2.2含量計(jì)算w含量＝（A樣×ρ對(duì)×V樣×B×1 000)/(A對(duì)×m藥),其中A樣為供試品峰面積，A對(duì)為對(duì)照品峰面積，V樣為提取液總體積（mL），ρ對(duì)為對(duì)照品濃度（mg/mL），m藥為黃柏藥材投料量（kg），B為稀釋倍數(shù)（B＝5）。
2.3提取次數(shù)的篩選按處方比例取黃柏、當(dāng)歸等藥材粗粉,加10倍量體積分?jǐn)?shù)70%乙醇回流提取3次,每次1 h,濾過。依法制備3份,按2.2項(xiàng)下方法分別測(cè)定各次提取率及得膏率。表1結(jié)果顯示：提取2次與3次提取率及得膏率相差不大,為了節(jié)約成本,因此確定提取次數(shù)為2次。表1提取次數(shù)篩選結(jié)果(略)
乙醇濃度的篩選按處方比例取黃柏、當(dāng)歸等藥材粗粉,分別加入10倍量體積分?jǐn)?shù)60%、70%、80%、90%的乙醇回流提取2次,每次1 h,濾過,合并濾液,搖勻。平行制備3份,按2.2項(xiàng)下方法分別測(cè)定并計(jì)算提取率及得膏率。表2結(jié)果顯示：提取率以體積分?jǐn)?shù)70%、80%乙醇最高,得膏率體積分?jǐn)?shù)60%乙醇最高,體積分?jǐn)?shù)90%乙醇提取率及得膏率均較低,因此確定以體積分?jǐn)?shù)60%、70%、80%乙醇進(jìn)行正交試驗(yàn)。表2乙醇濃度的篩選結(jié)果(略)
2.5正交試驗(yàn)
2.5.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)以乙醇用量、乙醇濃度、提取時(shí)間為因素采用3因素3水平正交設(shè)計(jì)表確定最終提取工藝。見表3。表3因素水平表（略）
2.5.2正交試驗(yàn)方法與結(jié)果按處方比例稱取黃柏、當(dāng)歸等藥材粗粉,根據(jù)上述正交表進(jìn)行試驗(yàn),按2.2項(xiàng)下方法分別測(cè)定提取率及得膏率,采用綜合評(píng)分法進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析(其權(quán)重指數(shù)分別為0.8、0.2),以確定最佳提取工藝,數(shù)據(jù)及結(jié)果見表4,方差分析見表5。表5方差分析表（略）
從正交試驗(yàn)結(jié)果和方差分析可知,3個(gè)因素對(duì)鹽酸小檗堿的提取率無(wú)顯著性影響；得膏率中各因素的影響程度依次為B>A>C。體積分?jǐn)?shù)60%乙醇提取,得膏率高但提取率較低,體積分?jǐn)?shù)80%、70%乙醇提取結(jié)果相差不大,綜合考慮,確定最佳提取工藝為A3B2C1,即用體積分?jǐn)?shù)70％乙醇回流提取2次,每次1 h。表4正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)及結(jié)果（略）注：s綜合=s鹽酸小檗堿提取率+s得膏率；s鹽酸小檗堿提取率=p鹽酸小檗堿提取/p最大鹽酸小檗堿提取×0.8×100；s得膏率=p得膏/p得膏率最大值×0.2×100
2.5.3中試放大試驗(yàn)按處方比例稱取黃柏、當(dāng)歸等藥材粗粉,共25.5 kg,加體積分?jǐn)?shù)70%乙醇(8、6倍量)回流提取2次,每次1 h。
表6結(jié)果顯示：中試放大試驗(yàn)驗(yàn)證了上述正交試驗(yàn)法確認(rèn)的提取工藝參數(shù)可行,其中鹽酸小檗堿的含量為30.38 g/kg,提取率為87.29%。表63批中試結(jié)果（略）
3討論
黃柏具有抗菌消炎、降壓等作用,其藥理、臨床作用之強(qiáng)弱,與鹽酸小檗堿含量高低有直接關(guān)系［3］,而鹽酸小檗堿易溶于熱水、乙醇,且在濃縮過程中易損失,在中藥復(fù)方制劑中常單獨(dú)提取。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道［4-5］,對(duì)于黃柏生物堿,乙醇提取優(yōu)于酸水滲漉和水提取，乙醇回流優(yōu)于其他提取方法。本工藝選擇乙醇回流提取,能有效提取鹽酸小檗堿,且工藝簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)。
為合理選擇正交設(shè)計(jì)各水平,先對(duì)加醇量進(jìn)行了預(yù)試,由于藥材的吸附作用,通常第1次乙醇提取液比加入液減少的體積大約相當(dāng)于藥材量的2倍體積,為提高生產(chǎn)時(shí)提取罐的利用率,本實(shí)驗(yàn)采用第2次提取溶劑加入量比第1次少2倍量的方式（如12、10或者10、8）,使提取罐的使用率高達(dá)100%。
色譜條件參照中國(guó)藥典（2005年版）一部黃柏藥材項(xiàng)下含量測(cè)定方法,經(jīng)試驗(yàn)用于本品提取液含量測(cè)定,鹽酸小檗堿峰尖銳,分離度大于1.5,且陰性無(wú)干擾。本試驗(yàn)確定的工藝簡(jiǎn)便、穩(wěn)定,鹽酸小檗堿提取率高,適用于工業(yè)生產(chǎn)。
【參考文獻(xiàn)】
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