仔豬水腫病的診治

仔豬水腫病的診治

是仔豬較為常見(jiàn)的一種急性、致死性疾病，俗稱(chēng)為“紅眼病”和“小豬搖擺病”。該病主要發(fā)生于斷奶仔豬，生長(zhǎng)快健壯的仔豬較常見(jiàn)，瘦小的仔豬較少發(fā)生。本病發(fā)病突然，病程短，死亡快，給養(yǎng)豬戶帶來(lái)了很大的經(jīng)濟(jì)損失，是當(dāng)前發(fā)展養(yǎng)豬業(yè)的一大障礙。病死豬主要剖檢變化為全身淋巴結(jié)切面多汁，水腫出血，特別是胃壁水腫，胃大彎和賁門(mén)處水腫明顯，水腫部位變厚，切面可見(jiàn)肌層和黏膜層之間有無(wú)色透明的膠凍樣水腫液，胃底彌漫性出血；肺、肝充血水腫；腎包膜增厚水腫；膀胱黏膜輕度出血；胸、腹腔與心包腔以及眼瞼、結(jié)膜、顏面、頸部等全身多處水腫部位都積有透明的或淡黃色液體，液體在空氣中凝結(jié)成膠凍狀[5]。我們從患病仔豬體內(nèi)分離出病原菌，對(duì)其進(jìn)行形態(tài)和生化鑒定、小鼠致病力試驗(yàn)，鑒定為大腸桿菌。并用紅霉素、四環(huán)素、慶大霉素、頭孢他定等14種抗生素對(duì)分離的細(xì)菌進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)。鑒于本病以上和治愈率低的特點(diǎn)，我們利用分離培養(yǎng)的細(xì)菌進(jìn)行增殖培養(yǎng)，并自制了生理鹽水菌液和營(yíng)養(yǎng)肉湯菌液兩種滅活疫苗。結(jié)果表明菌種在普通瓊脂斜面上生長(zhǎng)旺盛，兩種疫苗安檢小鼠全部健活，效力檢驗(yàn)生理鹽水和營(yíng)養(yǎng)肉湯菌液組免疫保護(hù)率分別達(dá)到75%和87.5%。并且滅活疫苗制備工藝簡(jiǎn)單，切實(shí)可行，疫苗安全性好，保護(hù)性強(qiáng)，值得進(jìn)一步研究。現(xiàn)將我們的結(jié)果報(bào)告如下：

1材料和方法

1.1 患病豬 由萊陽(yáng)某養(yǎng)豬場(chǎng)提供

1.2 培養(yǎng)基 普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂、SS瓊脂和三糖鐵瓊脂：購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司；營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、吲哚、甲基紅和枸櫞酸鹽利用實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基自行配制。

1.3生化試驗(yàn)管 葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、鼠李糖、蔗糖、尿素、木糖、麥芽糖、衛(wèi)矛醇、七葉苷：購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司

1.4 藥敏試紙 紅霉素(E)、四環(huán)素(TE)、慶大霉素(GM)、頭孢唑啉(CZ)、頭孢他定(CAZ)、萬(wàn)古霉素(VA)、青霉素(P)、丁胺卡那(AN)、苯唑西林(OX)、呋喃妥因(FM)、氨芐青霉素(AM)、頭孢哌酮(CFP)、阿莫西林(AMC)、環(huán)丙沙星(CIP)：均購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司

1.5 動(dòng)物 健康小白鼠.

2. 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 病原的分離和鑒定

2.1.1 取病死仔豬肝臟和腸系膜淋巴結(jié)于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、鮮血瓊脂、麥康凱瓊脂、伊紅美藍(lán)瓊脂和SS營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上分離，37.8℃ 24h培養(yǎng)后,選擇麥康凱呈紅色和典型溶血性菌落鑒定。

2.1.2 病原的涂片鏡檢 取病死仔豬肝臟、脾臟、腸系膜淋巴結(jié)涂片，革藍(lán)氏和美藍(lán)染色鏡檢，取細(xì)菌培養(yǎng)菌落用生理鹽水稀釋后涂片，革蘭氏和美藍(lán)染色鏡檢。

2.2 生化反應(yīng) 將初選的可疑菌落純化后分別接種于三糖鐵瓊脂和枸櫞酸鹽利用實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基，吲哚、甲基紅、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、木糖、鼠李糖、甘露醇、山梨醇、衛(wèi)矛醇、尿素反應(yīng)管內(nèi)，37℃反應(yīng)48-72h。凡符合于大腸桿菌屬定義者留作抗原鑒定和致病性試驗(yàn)[2]。

2.3 小鼠攻毒試驗(yàn) 取血瓊脂上溶血菌落用生理鹽水溶解，測(cè)得其濃度為16億/ml，用生理鹽水稀釋為1.6億/ml供攻毒試驗(yàn)用。實(shí)驗(yàn)組小鼠三只，每只腹腔注射0.1ml菌液，對(duì)照組三只，每只腹腔注射0.1/ml生理鹽水，觀察7d，取死亡小鼠的肝臟和脾臟涂片染色鏡檢，并涂布于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂，血瓊脂和麥康凱瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24h[7]。

2.4 菌種增殖 取麥康凱上呈紅色和典型的溶血菌落，接種于普通瓊脂斜面37℃培養(yǎng)18-24h，4℃冰箱保存，作為一級(jí)種子備用。

2.5 藥敏試驗(yàn) 用滅菌棉試子沾取待檢細(xì)菌6h培養(yǎng)物，均勻地涂布在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，然后夾取各種藥物紙片，按一定間隔貼放到瓊脂培養(yǎng)基的表面，置37.8℃溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18h，觀察抑菌圈直徑大小。

2.6 滅活苗的制備

2.6.1 抗原液的制備 生理鹽水菌液組 取一級(jí)種子接種于普通瓊脂平板中，37℃培養(yǎng)18-24h，用滅菌生理鹽水洗下菌苔并混合。

營(yíng)養(yǎng)肉湯菌液組 取一級(jí)種子分別接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37.8℃培養(yǎng)18-24h，做純度檢驗(yàn)。

2.6.2 純度檢驗(yàn)和活菌計(jì)數(shù) 抗原液制備完成后，取樣用普通瓊脂做純度檢驗(yàn)，同時(shí)進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。

2.6.3 滅活 抗原液按量加入0.3%甲醛溶液，于37.8℃振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。

2.7 疫苗的檢驗(yàn)

2.7.1性狀檢查

生理鹽水菌液組 疫苗靜止后，下層有少許沉淀，上層為半透明液體，搖動(dòng)后沉淀懸浮，呈均質(zhì)白色混懸液。

營(yíng)養(yǎng)肉湯菌液組 疫苗呈棕黃色半透明液體。

2.7.2無(wú)菌檢驗(yàn) 隨機(jī)抽檢樣品，分別接種于普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面，鮮血瓊脂板37℃培養(yǎng)48h，檢查無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。⑴

2.7.3 安全檢驗(yàn) 注射疫苗后，觀察7天，應(yīng)正常方可使用，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見(jiàn)下表。

表1安全檢驗(yàn)試驗(yàn)設(shè)計(jì)

組別 注射部位 注射量（ml 小鼠（只）

生理鹽水菌液組 肌肉/皮下 0.2/0.2 3/3

營(yíng)養(yǎng)肉湯菌液組 肌肉/皮下 0.2/0.2 3/3

2.7.4效力檢驗(yàn) 20只小鼠，10只每只腹腔注射生理鹽水菌液滅活苗0.2ml，另10只每只腹腔注射營(yíng)養(yǎng)肉湯菌液滅活苗0.2ml，免疫14d后，連同另10只未免疫對(duì)照小鼠每只腹腔注射強(qiáng)毒菌液0.1ml含1.6億/ml，繼續(xù)觀察10-14d[6]。

3結(jié)果

3 病原菌的分離 結(jié)果見(jiàn)表2

表2病原菌分離結(jié)果

培養(yǎng)基 菌落特征

普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂 光滑、灰白、濕潤(rùn)、圓形邊緣整齊稍隆起的小菌落

血瓊脂平板 有明顯的β溶血環(huán)

麥康凱瓊脂 光滑、濕潤(rùn)、紅色圓形菌落

伊紅美藍(lán)瓊脂 紫黑色帶金屬光澤的圓形菌落

SS瓊脂 紅色的中等大小的菌落

制片染色鏡檢為典型的G－球桿菌。

3.2 常規(guī)生化鑒定結(jié)果 結(jié)果見(jiàn)表3

表3大腸桿菌生化鑒別結(jié)果

培養(yǎng)液（基） 反應(yīng)結(jié)果 培養(yǎng)液（基） 反應(yīng)結(jié)果

三糖鐵 鼠李糖

枸櫞酸鹽利用試驗(yàn) - 蔗糖 -

產(chǎn)H2S - 甘露醇 ⊕

吲哚 山梨醇

甲基紅 七葉苷 -

葡萄糖 ⊕ 衛(wèi)矛醇 -

乳糖 尿素 -

木糖 麥芽糖

注： ：⊕產(chǎn)酸產(chǎn)氣，培養(yǎng)液（基）變顏色，并有氣泡產(chǎn)生；-無(wú)變化，培養(yǎng)液（基）仍為原色； 培養(yǎng)液（基）變顏色。由表3結(jié)果可見(jiàn)，可疑菌的生化反應(yīng)特性均符合大腸埃希氏菌屬定義，屬于溶血性大腸桿菌。

3.3小鼠攻毒試驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組小鼠第5天時(shí)全部死亡，對(duì)照組健康無(wú)異常。3.4藥敏試驗(yàn)結(jié)果 應(yīng)用紙片法對(duì)致病性很強(qiáng)的分離菌進(jìn)行了14種抗菌藥物的敏感實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表4

表4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

Table4 The antibiotics sensitivity testing of E.coli

抗生素Antibiotics 抑菌圈直徑（mm）Dia of antibiorobial 結(jié)果判定analysis of result

丁胺卡那 30 高敏

頭孢哌酮 28 高敏

頭孢他定 27 高敏

頭孢唑啉 22 高敏

呋喃妥因 17 中敏

阿莫西林 15 中敏

慶大霉素 12 低敏

四環(huán)素 10 低敏

紅霉素 0 耐藥

萬(wàn)古霉素 0 耐藥

青霉素 0 耐藥

苯唑西林 0 耐藥

氨芐青霉素 0 耐藥

環(huán)丙沙星 0 耐藥

注：抑菌圈直徑

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