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穿琥寧粉針劑體外抗HIV
作者：曾祥鳳，曾耀英, 李海仙，林長樂，趙令齋，李莉平，肇靜嫻【關(guān)鍵詞】 穿琥寧粉針劑；艾滋病病毒；細(xì)胞融合；鈣黃綠素
AntiHIV1 effect in vitro of Chuanhuning injection
【Abstract】 AIM: To investigate the inhibitory effect of Chuanhuning (CHN) injection on human immunodeficiency virus type 1 (HIV1) infection in vitro. METHODS: CalceinAM stained H9/HIV1ⅢB cells were treated with serially diluted CHN injection, then cocultured with target cells MT2, and HIV1mediated cell fusion was observed under a fluorescent microscope. The protective effect of CHN on HIV1infected cells was determined by MTT. Viral replication was evaluated by measuring the level of p24 antigen in culture supernatants by ELISA. RESULTS: CHN injection could suppress the fusion of MT2 and H9/HIV1ⅢB cells （EC50: 5.49 mg/L，SI: 327.6）, thus protecting HIV1 infected cells from death （EC50: 64.57 mg/L，SI: 27.85）， and decreasing p24 antigen release (EC50: 194.67 mg/L，SI: 9.23）. CONCLUSION: CHN injection can inhibit HIV1 infection in vitro.
【Keywords】 ChuanHuNing; HIV1; cell fusion; Calcien AM
【摘要】 目的: 探討穿琥寧粉針劑在體外是否具有抗HIV作用. 方法：采用熒光染料Calcien AM標(biāo)記HIV感染的慢性H9細(xì)胞（H9/HIV1ⅢB）與不同稀釋濃度的穿琥寧藥物作用后，與靶細(xì)胞MT2細(xì)胞混合培養(yǎng)，觀察MT2和H9/HIV1ⅢB融合細(xì)胞的變化；MTT法檢測穿琥寧對(duì)HIV感染細(xì)胞的保護(hù)作用；HIV1P24抗原試劑盒檢測藥物作用后的細(xì)胞培養(yǎng)上清P24抗原含量的變化. 結(jié)果：穿琥寧粉針劑能夠抑制MT2和H9/HIV1ⅢB細(xì)胞融合（其抑制融合的EC50為5.49 mg/L，選擇指數(shù)SI為327.6）；能夠保護(hù)HIV感染細(xì)胞的死亡（EC50為64.57 mg/L，SI為27.85）和減少HIV1 P24抗原的表達(dá)（EC50為194.67 mg/L，SI為9.23）. 結(jié)論：穿琥寧粉針劑在體外具有抗HIV1的作用.
【關(guān)鍵詞】 穿琥寧粉針劑；艾滋病病毒；細(xì)胞融合；鈣黃綠素
0引言
隨著我國人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV) 感染流行形勢的日益嚴(yán)重，臨床就診的HIV感染者/AIDS（acquired immunodeficiency syndrome）患者在逐步增多，臨床治療的壓力越來越大［1］. 但由于我國治療艾滋病的藥物開發(fā)及研制工作滯后，故目前尚無療效可靠，經(jīng)濟(jì)實(shí)用的藥物. 雖然世界上有公認(rèn)的治療艾滋病有效的高效抗逆轉(zhuǎn)錄酶病毒聯(lián)合療法(highly active antiretroviral therapy，HAART)，由于價(jià)格昂貴且副作用極大［2-3］，難為我國患者廣泛接受并長期應(yīng)用. 因此，研究和開發(fā)有效的傳統(tǒng)中藥防治艾滋病非常重要.
穿琥寧是從穿心蓮葉中提取的一種純中藥制劑，屬于一種低毒高效的抗病毒藥. 具有抗炎、抗病毒及清熱解毒的作用，臨床已廣泛用于感染性疾病的治療,尤其對(duì)病毒性疾病有較好的療效［4-5］. 但穿琥寧對(duì)HIV/AIDS的作用報(bào)道很少, 本研究用不同濃度的穿琥寧和H9/HIV1ⅢB作用觀察其是否具有抗HIV1的作用.
1材料和方法
1.1材料中藥穿琥寧粉針劑（哈爾濱二聯(lián)藥業(yè)有限公司）用PBS配制為100 g/L存儲(chǔ)液，無菌分裝，-20℃貯存?zhèn)溆? AZT（疊氮胸苷）(3′ Azido3′deoxythymidine)（美國 Biochemika Fluka） 100 mg，用二甲亞砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)配成100 g/L ，分裝-20℃貯存?zhèn)溆? 藥物存儲(chǔ)液于實(shí)驗(yàn)前用RPMI1640培養(yǎng)基按需要稀釋至所需工作濃度. 鈣黃綠素（CalceinAM，美國 Molecular Probes），用DMSO溶解配制成1 mmol/L，分裝，-20℃貯存?zhèn)溆? 噻唑藍(lán)(MTT, Sigma) PBS配制5 g/L，-20℃貯存?zhèn)溆? P24抗原檢測試劑盒（美國 ZeptoMetrix）. RPMI1640培養(yǎng)液(美國Gibco), 配制時(shí)加入青霉素1×105 U/L, 鏈霉素100 mg/L, 過濾除菌，使用時(shí)加入100 mL/L (V/V)胎牛血清（FBS）. HIV1ⅢB感染的慢性H9細(xì)胞（H9/HIV1ⅢB）和MT2細(xì)胞來自美國，由南方醫(yī)科大學(xué)免疫教研室惠贈(zèng).
1.2方法
1.2.1細(xì)胞和病毒培養(yǎng)H9/HIV1ⅢB細(xì)胞和MT2細(xì)胞用含100 mL/L (V/V)FBS的R
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