淺析微柱凝膠技術在新生兒溶血病檢測中的應用

摘要：新生兒溶血病一般特指母嬰血型不合而引起的胎兒或新生兒免疫性溶血性疾�。╤aemolytic disease of the newborn），簡稱HDN。在我國，因ABO血型不合引起的新生兒溶血病較為常見，Rh血型不合引起的新生兒溶血病次之。新生兒溶血病嚴重時，可出現(xiàn)核黃疸，導致智力發(fā)育不全、腦癱等后遺癥。新生兒溶血病是嚴重影響新生兒健康的疾病。采用微柱凝膠技術對新生兒溶血病診斷的三項試驗(直接抗球蛋白試驗、抗體放散試驗、血清游離抗體試驗)的快速檢出，更有利于臨床及時對患兒的診斷和治療。

關鍵詞： 微柱凝膠技術 新生兒溶血病 血清學檢測

微柱凝膠技術（microcolumn get Immunoassay）是目前國內外血型血清學檢查方法之一。其設計理論先進，具有操作簡單迅速、標本用量少、結果易判斷、敏感性高和特異性強的優(yōu)點。
1 材料與方法
1.1 試劑與儀器 試劑：DianaGeL coombs卡（每卡含8個微柱孔管），每個微柱孔管含低離子強度緩沖液（LISS）浸泡中的微粒篩，加上多價抗人球蛋白（兔多克隆抗IG和單克隆抗C3d克隆12011.D10）。
標準紅細胞：0.8%O型篩查細胞（）批號：8004801 801001 801101 801201 900201 900101 900301 900401。0.8%A型細胞0.8%B型細胞 批號：8001801 8001901 8007801 8002501 900201 901001 900501 900601 901001。
Diasnvstic Grifols S.A卡：用于ABO、Rh血型、直接抗球蛋白試驗，批號：50040101 60010101 80010201 80010301 80030101 80060201。
DianaGeL Coombs卡（抗人球卡）批號：80080101 80420101 80750101 81180101 81380101 81470101。
儀器：專用的Diana Fuag 離心機和Diana孵育器。
以上試劑和儀器均為GRIFULS公司產品，由沈陽麥迪卡爾有限公司提供。
1.2 樣本來源 2007年1月-2009年5月住在我院新生兒科患兒（母親是O型，患兒是A型或B型）出生后1-3天皮膚鞏膜黃染，血紅蛋白降低，血清膽紅素高于正常值，對患兒采集EDTA抗凝血3毫升共541份標本，實驗室對所送標本必須在接到后24小內檢查完畢。
1.3實驗方法
1.3.1 標本處理 取患兒EDTA抗凝血3毫升，將血漿分離，剩余紅細胞經0.9%生理鹽水洗滌4遍后，取壓積紅細胞5微升加入Diana稀釋液2（低離子介質液）500微升中制成1%紅細胞懸液。剩余的壓積紅細胞加入和壓積紅細胞一倍的生理鹽水，經56℃水�。ㄊ帜迷嚬懿粩嘣谒�中輕輕震動10分鐘），拿出保溫離心提取粉紅色上清（放散液）備用。
1.3.2 取Dignostic Grifols.SA微柱凝膠卡一張，各孔加入患兒1%紅細胞懸液50微升，放入Diana Fuge 離心機離心10分鐘，觀察結果。
1.3.3 取Diana GeL coombs卡一張，拿出6孔分別標識ABO、ABO，按標識的血型分別在各孔中加入0.8%A型紅細胞、0.8%B型紅細胞和0.8%O型紅細胞（等量Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ O型紅細胞混合液）50微升。前3孔各加入患兒血漿50微升(游離抗體試驗)，后3孔各加入患兒紅細胞放散液50微升（抗體放散試驗）。置Diana孵育器15分鐘后，放Diana Fuge專用離心機離心10分鐘，按照微柱凝膠卡式法的三項試驗說明書判讀結果。
1.4實驗室新生兒溶血病診斷標準 三項試驗同時陽性或放散試驗陽性可確診為新生兒溶血病。若直抗試驗和游離試驗1項或2項陽性者，可判斷為疑似新生兒溶血病。
2 結果
3 討論
目前，在我國診斷新生兒溶血病的實驗室檢查主要是三項試驗（直接抗球蛋白試驗、游離抗體試驗、放散試驗），直接抗球蛋白試驗主要檢測新生兒紅細胞是否被來自母親IgG抗A（B）所致敏；游離抗體試驗是患兒血清的IgG抗A（B）來自母親，如果新生兒血清中發(fā)現(xiàn)與其紅細胞不配合的IgG抗A(B)時，表明嬰兒體內有抗體，可能受害；放散試驗采用的是試管抗球蛋白技術和微柱凝膠技術，用放散液與標準ABO型紅細胞反應，（與O型紅細胞反應視做陰性對照）均無凝集者，表明未查出抗體，A型新生兒紅細胞放散液只與標準A型紅細胞凝集，表明放散液檢出抗-A，而B型新生兒紅細胞放散液只與標準B型紅細胞凝集，表明放散液檢出抗-B，而A型新生兒紅細胞放散液與標準B型紅細胞凝集或B型新生兒紅細胞放散液與標準A型紅細胞凝集,表明放散液中檢出抗-A，B。我們采用微柱凝膠技術對我院541例母嬰血型不合且有嚴重的新生兒黃疸或高膽紅素血癥患兒的血標本進行了三項試驗，結果表明：ABO母嬰血型不合新生兒溶血病（HDN）171例，其中OA115例，OB56例。ABO溶血病因紅細胞的抗體結合較少，直接抗球蛋白試驗常為陰性或弱陽性，血清游離抗體陽性，抗體釋放試驗陽性。Rh溶血病直接抗球蛋白試驗強陽性，游離抗體強陽性，抗體釋放試驗強陽性。我院新生兒科對溶血

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