探討益壽飲延緩D-半乳糖所致衰老作用機(jī)理

摘要：　目的探討益壽飲延緩D-半乳糖所致衰老作用機(jī)理。方法采用小鼠頸背部皮下注射D-半乳糖溶液制備小鼠亞急性衰老模型，空白對照組、模型對照組、陽性對照組（維生素E 20 mg/kg）和3個(gè)不同劑量的益壽飲給藥組（1，2，3g生藥/kg）分別灌胃45 d后，測定小鼠脾臟指數(shù)和全血中過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力。結(jié)果益壽飲高、中、低3個(gè)劑量組及陽性對照組均能顯著提高亞急性衰老小鼠脾臟指數(shù)和全血中CAT和GSH-Px活力（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)論益壽飲對于D-半乳糖誘發(fā)的亞急性衰老模型有明顯的延緩衰老作用。

關(guān)鍵詞： 益壽飲延緩衰老；脾臟指數(shù)；過氧化氫酶；谷胱甘肽過氧化物酶
　
中藥益壽飲由蓮子、山藥等若干味中藥提取制備而得。根據(jù)查閱相關(guān)書籍及文獻(xiàn)資料，該方中各味藥物均具有一定的益氣養(yǎng)陰、延緩衰老作用。為了系統(tǒng)地研究該復(fù)方中藥提取液的延緩衰老作用，筆者考察了益壽飲提取液對D-半乳糖所致亞急性衰老小鼠的脾臟指數(shù)、全血中過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力的影響，從而對益壽飲提取液延緩衰老的效果及作用機(jī)理進(jìn)行初步探討。
　　1 材料與儀器
　　1.1 動(dòng)物健康二級昆明種小鼠72只，雌雄兼半，體質(zhì)量在18～22 g，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，SCXK（京）2005-0013。
　　1.2 藥物益壽飲提取液：由中藥蓮子、山藥等按照處方經(jīng)水提取后濃縮制備，本實(shí)驗(yàn)室自制；陽性藥物維生素E膠丸（批號20080124），由北京雙鶴藥業(yè)生產(chǎn)；D-半乳糖（批號20071201），購自北京化學(xué)試劑公司。
　　1.3 試劑CAT試劑盒（批號：20080518）、GSH-Px試劑盒（批號：20080519），均由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。
　　1.4 儀器752-紫外光柵分光光度計(jì)，上海分析儀器總廠制造；AE100電子天平，梅特勒-托利多儀器有限公司；LD5-2A離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠。
　　2 方法
　　2.1 動(dòng)物分組與給藥劑量將健康二級昆明種小鼠隨機(jī)分成6組：空白對照組，模型對照組，益壽飲低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性對照組，各組小鼠皮下注射及灌胃劑量見表1。各組動(dòng)物連續(xù)給藥45 d，第46天精確稱取小鼠體質(zhì)量后，摘除眼球取血，待測CAT和GSH-Px活力；取血后將小鼠脫臼處死，分離小鼠脾臟，計(jì)算小鼠脾臟指數(shù)。表1 各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥劑量（略）
　　2.2 測定指標(biāo)及測定方法
　　2.2.1 脾臟指數(shù)記錄小鼠脾臟重量及體質(zhì)量，按照下面公式計(jì)算脾臟指數(shù)。
　　脾臟指數(shù)=脾臟重量/mg體質(zhì)量/g
　　2.2.2 全血中CAT測定方法取小鼠新鮮血液20 μl，加雙蒸水980 μl，混勻配成1∶49的溶血液，按照試劑盒說明書進(jìn)行測定。
　　2.2.3 全血中GSH-Px測定方法取小鼠新鮮血液10 μl，加雙蒸水1 490 μl，混勻配成1∶149的溶血液，充分混勻后，放置5 min直至玻璃管中的溶血液對光呈完全透明狀，按照試劑盒說明書進(jìn)行測定。
　　2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用Statistica 6.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　
　　3 結(jié)果
　　3.1 益壽飲對小鼠脾臟指數(shù)的影響由表2數(shù)據(jù)可以看出，皮下注射D-半乳糖溶液（100 mg/kg體質(zhì)量）45 d后，模型對照組小鼠脾臟指數(shù)明顯低于空白對照組，證明皮下注射D-半乳糖溶液制備得到的亞急性衰老小鼠模型具備自然衰老小鼠的特征，而3個(gè)給藥劑量組及陽性對照組與模型對照組相比，小鼠脾臟指數(shù)分別提高了14.44%，21.04%，23.39%和14.43%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，空白對照組、陽性對照組、益壽飲中劑量組、益壽飲高劑量組與模型對照組之間均有顯著性差異（P＜0.05），其中空白對照組、益壽飲中劑量組和高劑量組與模型對照組之間有極顯著差異（P＜0.01）；空白對照組與陽性對照組、益壽飲低劑量組之間有顯著差異（P＜0.05），其余各組之間均無顯著性差異（P＞0.05）。表2 各組動(dòng)物給藥后脾臟指數(shù)變化（略）
　　3.2 益壽飲對小鼠全血中CAT和GSH-Px的影響
　　由表3數(shù)據(jù)可以看出，皮下注射D-半乳糖溶液（100 mg/kg體質(zhì)量）45 d后，模型對照組小鼠全血中CAT和GSH-Px活力明顯降低（降低百分率為67.88%和37.60%），而3個(gè)給藥劑量組及陽性對照組與模型對照組相比，小鼠全血中CAT活力分別提高了110.54%，154.31%，190.70%和238.83%；GSH-Px活力分別提高了36.18%，38.43%，48.28%和35.17%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，空白對照組、陽性對照組及益壽飲低、中、高3個(gè)給藥劑量組與模型對照組全血中CAT活力均有極顯著性差異（P＜0.01）；益壽飲低劑量組、中劑量組與陽性對照組有顯著性差異（P＜0.05），其中低劑量組與陽性對照組之間有極顯著性差異（P＜0.01）；空白對照組與低劑量組、中劑量組有極顯著性差異（P＜0.01）；低劑量組與中劑量組、高劑量組之間均有顯著性差異（P＜0.05），其中低劑量組與高劑量組之間有極顯著性差異（P＜0.01），其余各組相互之間均無顯著性差異（P＞0.05）。表3 各組動(dòng)物給藥后全血中CAT和GSH-Px活力變化（略）
　4 討論
衰老一般是指機(jī)體生長發(fā)育成熟后，機(jī)體的生理功能逐漸下降，組織器官逐步發(fā)生退行性改變，并最終走向死亡的過程。衰老雖然是一切生物發(fā)展的自然規(guī)律，而且具有不可逆性，但是在一定條件下，衰老的速度是可以減慢的。從古至今，人們一直在探索衰老的機(jī)制，試圖延緩衰老。到目前為止，有關(guān)衰老的學(xué)說有很多，有代表性的有自由基學(xué)說［1］、免疫學(xué)說［2］、線粒體學(xué)說［3］、內(nèi)分泌功能減退學(xué)說［4］、端粒學(xué)說［5］等。本文從自由基和免疫學(xué)說兩方面對益壽飲延緩衰老的作用機(jī)理進(jìn)行了初步探討。
脾臟是細(xì)胞成熟分化成漿細(xì)胞的重要器官，反映體液免疫的功能，同時(shí)，脾臟還具有內(nèi)分泌功能，是機(jī)體免疫-神經(jīng)-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)環(huán)路中心的一個(gè)重要組成部分［6］。此外，脾臟是機(jī)體最大的周圍淋巴器官，由白髓和紅髓組成：白髓是密集的淋巴組織，圍繞中央靜脈而分布，由動(dòng)脈周圍淋巴鞘和脾小結(jié)組成，動(dòng)脈周圍淋巴鞘主要由大量T細(xì)胞構(gòu)成，是脾內(nèi)的胸腺依賴區(qū)，脾小結(jié)主要由B細(xì)胞構(gòu)成；紅髓由脾索和脾血竇組成。在人類，65歲以上老人免疫系統(tǒng)功能下降同時(shí)，脾生發(fā)中心數(shù)量和體積比26～30歲年輕人明顯減少；大于22月齡小鼠脾內(nèi)生發(fā)中心數(shù)量及其內(nèi)的細(xì)胞數(shù)減少60%～95%［7］。隨年齡的增長，白

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