幽門螺桿菌實驗室檢測與應用價值

作者：胥維勇，楊紅，楊群，范小莉，何娟
　　1983年由澳大利亞醫(yī)生R·Warren和B·Marshall從胃黏膜組織中成功分離培養(yǎng)出幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)以來,Hp與慢性活動性胃炎和消化性潰瘍以及在發(fā)病過程中的作用已得到證實。但Hp感染缺乏臨床表現(xiàn)特征，Hp感染診斷主要依靠實驗室檢測。Hp檢測技術日益完善和準確，方法從細菌形態(tài)學發(fā)展進入到Hp全基因序列測定分析階段。Hp感染檢測方法可分為：取胃黏膜標本檢測Hp，包括細菌培養(yǎng)、快速尿素酶試驗、組織涂片和切片染色；呼氣試驗和尿氨排出試驗檢測Hp；血清免疫學方法檢測Hp。根據(jù)檢測是否需做胃鏡檢查分為：直接檢測法，必須在胃鏡下取材，包括細菌培養(yǎng)、涂片染色、快速尿素酶試驗、活檢標本切片染色和多聚酶鏈反應等；間接檢測法，不需要胃鏡下取材，包括13 C、14 C呼氣試驗、15 N尿氨排出試驗和血清免疫學檢測等。Hp感染實驗室檢測的常用方法有：
【關鍵詞】 幽門螺桿菌；方法學；應用價值 論文網(wǎng)在線
　　1 微生物學方法
　　1.1 細菌培養(yǎng)法 從胃黏膜活檢標本中分離培養(yǎng)出Hp，再用形態(tài)學和生物化學方法鑒定，是診斷Hp感染最可靠的方法。Hp是微需氧菌，不能在大氣下和絕對厭氧條件下生長，它需要的氣體條件是N2 85%、CO2 10%、O2 5%，還需要有一定的濕度和較好的營養(yǎng)成分。Hp生長緩慢，形成的菌落細小，必須添加抑制雜菌生長的抗生素，才能提高Hp的檢出率。盡管Hp感染診斷的金標準是分離培養(yǎng)，但它需要一些特殊設備和試驗條件，國內(nèi)尚未廣泛開展，至今只有少數(shù)實驗室把它用于科研，而不作為常規(guī)檢測而用于臨床。
　　1.2 涂片檢測法 在胃鏡檢查時用細胞刷在胃黏膜表面刷取黏液成分或取活檢標本直接涂片，經(jīng)革蘭(Grams)染色，在光學顯微鏡下觀察，Hp呈Grams陰性，彎曲狀、弧狀、S形和C形，形態(tài)特征較明顯。涂片檢測Hp是一種簡單實用的方法,涂片標本未經(jīng)任何處理不受外界因素影響，菌體保持完整，形態(tài)與生活時相仿。為簡便染色過程,Grams染色亦可簡化為石碳酸復紅單染法［1］，染色效果不比Grams染色遜色。還可采用相差顯微鏡直接觀察涂片檢測Hp和用吖啶橙染色，熒光顯微鏡觀察檢測Hp。
　　2 快速尿素酶試驗
　　Hp產(chǎn)生尿素酶的能力強，尿素酶分解胃液中尿素生成NH3和CO2，快速尿素酶試驗用于胃鏡檢查中診斷有無Hp感染。試驗試劑包括尿素、pH指示劑(酚紅)、緩沖液和防腐劑。在酸性條件下，當pH值≤6.8時，酚紅指示劑呈黃褐色，如果活檢標本中有Hp存在，尿素酶分解尿素產(chǎn)生NH3使試劑pH值發(fā)生變化而升至≥8.4，這時酚紅指示劑由黃褐色變?yōu)榧t或紫紅色。目前常用的尿素酶試劑在與胃鏡活檢標本接觸后幾分鐘后便可顯色，快速尿素酶試驗屬于間接試驗，標本大小、細菌多少、反應時間、溫度和濕度均可影響尿素酶試驗結(jié)果。尿素酶試驗具有快速、簡便的優(yōu)點，特別適合基層醫(yī)院推廣使用。
　　3 同位素示蹤劑方法
　　這類方法主要是采用讓患者口服同位素標記的尿素，利用Hp產(chǎn)生尿素酶能分解尿素的原理，以觀察胃中Hp分解尿素的能力，以此判斷患者是否感染了Hp及感染的程度，這類試驗現(xiàn)有兩類三種。Hp具有較強的內(nèi)源性尿素酶，能分解胃內(nèi)及核素標記的尿素，產(chǎn)生CO2和NH3,CO2被吸收后經(jīng)肺呼出，分析呼氣中的13 CO2或14 CO2即可診斷Hp的存在。根據(jù)呼氣試驗類似的原理，15 N?尿氨排出試驗是一種尿素在胃內(nèi)分解后，15 N經(jīng)吸收通過腎臟由尿排出的試驗，讓受試者口服穩(wěn)定性同位素15 N標記的尿素，然后測定尿液中排出的15 NH3來判斷胃內(nèi)Hp的感染情況。這類試驗方法屬于間接檢測，通過多次采集樣本后在儀器上進行測定分析。
　　3.1 呼氣試驗 呼氣試驗的原理是基于Hp產(chǎn)生大量的尿素酶，給感染Hp的患者口服同位素標記尿素溶液，則尿素被分解后產(chǎn)生同位素標記CO2由肺呼出�？墒占�呼氣樣本，用氣體同位素質(zhì)譜儀或液體閃爍掃描儀檢測同位素標記CO2的量來檢測Hp。根據(jù)標記物的不同，分為13 C和14 C呼氣試驗。
　　3.1.1 13 C標記的尿素 用穩(wěn)定性同位素13 C標記的尿素，讓患者口服后，尿素在胃中與Hp產(chǎn)生的尿素酶接觸后分解成13 CO2，測定其在總呼出量中所占的濃度，以判斷胃中是否感染了Hp和感染程度。這種方法的最大優(yōu)點是：體內(nèi)測定胃內(nèi)感染Hp的總體情況，避免了活檢標本Hp分布不均造成的假陰性的結(jié)果；13 C是一種穩(wěn)定性同位素，對機體無損傷；它除了定性以外，還可做定量測定。它的最大缺點是需用高精度氣體比值同位素質(zhì)譜儀來測定，這種設備是一般醫(yī)院不具備的貴重儀器。
　　3.1.2 14 C標記的尿素 用14 C標記的尿素讓患者口服，用閃爍掃描儀測定患者呼出的14 CO2，這種儀器在有核醫(yī)學科的醫(yī)院一般都有，測定方法比較方便。盡管它的優(yōu)點類似于13 CO2呼氣試驗，但是14C是一種放射性同位素，因此這項試驗對孕婦和小孩不宜使用。 論文網(wǎng)在線

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