慢性馬兜鈴酸腎病大鼠模型腎組織中蛋白質(zhì)組的差異表達(dá)

作者：孫世仁，陳光磊，寧曉暄,陳威

【關(guān)鍵詞】 馬兜鈴酸；大鼠；腎組織；雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳；蛋白質(zhì)組
　　Differentially expressed proteins in renal tissues of rat models of chronic aristolochic acid nephropathy
　　【Abstract】 AIM: To establish the 2dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D PAGE) profiles from aristolochic acid nephropathy (AAN) rat renal tissues and normal renal tissues and to identify the differentially expressed proteins. METHODS: Establish chronic renal interstitial fibrosis model in rats by peritoneal injection with aristolochic acid (AA). The total proteins from AAN models and normal rat renal tissues were separated by 2D PAGE. The differentially expressed proteins in 2DPAGE maps were analyzed using image analysis software. RESULTS: The rat models of AAinduced chronic renal interstitial fibrosis were established successfully. Clear, wellresolved and reproducible 2D PAGE patterns of AAN models and normal rat renal tissues were obtained and many differentially expressed proteins were found. CONCLUSION: The differentially expressed proteins of renal tissues can be induced by AA in Wistar rats. These proteins maybe mediate the toxicity of aristolochic acid to renal tissues.
　　【Keywords】 aristolochic acid; rats; renal tissues; 2D PAGE; proteome
　　【摘要】 目的： 制備慢性馬兜鈴酸腎病的大鼠模型，建立馬兜鈴酸腎病大鼠腎組織和正常大鼠腎組織的雙向電泳圖譜，從而展示差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，為進(jìn)一步篩選介導(dǎo)馬兜鈴酸毒性作用的蛋白質(zhì)分子奠定基礎(chǔ). 方法：應(yīng)用馬兜鈴酸腹腔注射制備大鼠慢性馬兜鈴酸腎病模型，提取其腎組織中總蛋白質(zhì)，采用雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)，對(duì)模型組和正常組腎組織中蛋白質(zhì)進(jìn)行差異展示. 結(jié)果：成功制備了慢性馬兜鈴酸腎病大鼠模型，并建立了模型組和正常組大鼠腎組織的雙向電泳圖譜，發(fā)現(xiàn)了差異蛋白質(zhì). 結(jié)論：馬兜鈴酸導(dǎo)致大鼠腎組織中蛋白質(zhì)差異表達(dá)，這些差異表達(dá)的蛋白質(zhì)可能介導(dǎo)了馬兜鈴酸的毒性作用.
　　【關(guān)鍵詞】 馬兜鈴酸；大鼠；腎組織；雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳；蛋白質(zhì)組
　　【中圖號(hào)】 R587.1
　　0引言
　　自Vanhrweghem等［1］報(bào)道了因減肥藥引起“中草藥腎�。–hinese herbs nephropathy，CHN）”以來(lái)，含馬兜鈴酸成分的中草藥所致的腎損害馬兜鈴酸腎�。╝ristolochic acid nephropathy，AAN）越來(lái)越受到了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛重視. 由于一些常用中草藥及中成藥都含有馬兜鈴酸，因而由馬兜鈴酸引起的腎損害在臨床上十分常見［2］. 急性AAN主要表現(xiàn)為急性腎小管壞死，慢性AAN表現(xiàn)為寡細(xì)胞性腎間質(zhì)纖維化［2-3］，病情多為不可逆性，而且即使停服藥物，其腎損害仍然繼續(xù)進(jìn)展［4-5］. 絕大多數(shù)患者很快或逐漸進(jìn)入終末期腎衰，需要腎臟替代治療. 因此闡明馬兜鈴酸腎損害的分子機(jī)制，以進(jìn)行早期的診斷和治療（在蛋白質(zhì)或基因水平進(jìn)行干預(yù)和阻斷）將是緩解馬兜鈴酸腎損害的關(guān)鍵. 為此，我們建立慢性馬兜鈴酸腎病模型，用雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳篩選和比較馬兜鈴酸誘導(dǎo)的差異蛋白質(zhì)分子，為馬兜鈴酸導(dǎo)致腎損害的分子靶點(diǎn)研究奠定基礎(chǔ).
　　1材料和方法
　　1.1材料雌性Wistar大鼠，20～24 wk齡，體質(zhì)量190～210 g（第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）；馬兜鈴酸制劑：用馬兜鈴酸標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)生物制品研究所提供）配制成0.5 g/L的溶液,高壓滅菌, 置冰箱4℃下保存?zhèn)溆? 丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺、SDS、三（羥甲基）氨基甲烷、苯甲基磺酰氟（華美生物工程公司）；超純尿素（上海生物工程公司產(chǎn)品）；兩性電解質(zhì)pH 5～8（上海麗珠東風(fēng)技術(shù)有限公司）；DYYⅢ26型雙向電泳槽和梯度混合器（北京六一廠）；電泳儀（BioRad公司）.
　　1.2方法
　　1.2.1慢性馬兜鈴酸腎病動(dòng)物模型的建立根據(jù)文獻(xiàn)［6］進(jìn)行，將Wistar大鼠隨機(jī)分為2組. 馬兜鈴酸組（n=30）：每只大鼠腹膜內(nèi)注射馬兜鈴酸,劑量為5 mg/(kg

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