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堿性成纖維細(xì)胞生長因子在前列腺癌和良性前列腺增生組織中表達(dá)的
作者：劉艷波 沈維高 趙雪儉【摘要】 目的 探討堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF) 在前列腺癌和良性前列腺增生組織中表達(dá)的意義。方法 采用斑點(diǎn)雜交和免疫組化法測定50 例正常前列腺組織(正常對照組)、40 例良性前列腺肥大(BPH)組織和48 例前列腺癌組織中bFGF 的表達(dá)情況。結(jié)果 BPH和前列腺癌組織中bFGF的表達(dá)明顯高于正常對照組(P＜0?01)。bFGF 表達(dá)升高的程度與BPH的分度、前列腺癌的病理分級和臨床分期關(guān)系不顯著。結(jié)論 bFGF 與前列腺癌和前列腺增生的發(fā)生發(fā)展過程有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】 前列腺增生；前列腺癌；堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)
前列腺癌和前列腺增生是老年男性常見疾病。近年來研究資料表明前列腺癌和前列腺增生組織中存在許多分子表達(dá)異常，但是對其發(fā)病機(jī)制尚缺乏統(tǒng)一的認(rèn)識〔1,2〕。堿性成纖維細(xì)胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）是一種常見的內(nèi)皮細(xì)胞分裂原，通過自分泌或旁分泌機(jī)制促進(jìn)血管的生成、組織再生、抑制細(xì)胞凋亡及增強(qiáng)細(xì)胞侵襲能力等，與許多疾病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。研究結(jié)果顯示bFGF在前列腺癌和前列腺增生的發(fā)病過程中也發(fā)揮重要的作用〔3～7〕。我們采用斑點(diǎn)雜交和免疫組化染色方法,觀察了bFGF 在正常前列腺、良性前列腺增生(benign prostate hyperplasia，BPH)和前列腺癌組織中的表達(dá)及其與臨床的關(guān)系,并探討其臨床意義。
1 材料與方法
1?1 材料
選取吉林大學(xué)第三臨床醫(yī)院手術(shù)切除的BPH標(biāo)本40例，年齡55～73（平均62）歲。Rous分度:Ⅰ度8 例,Ⅱ度12例，Ⅲ度9例，Ⅳ度11例。前列腺癌標(biāo)本48 例，年齡54～71（平均66) 歲。WHO分級：高分化15例，中分化19例，低分化14例；Whitmore?Jewett 分期：A期12例,B期10例，C期16例，D 期10例。另取50例意外死亡者的正常前列腺標(biāo)本作為對照，年齡36～59 （平均49）歲。
1?2 試劑
熒光素標(biāo)記試劑盒購自華美公司。鼠抗人bFGF 單抗(mAb) 購自Invitrogen 公司。兔抗鼠IgG和ELISA試劑購自福州邁新生物試劑公司。限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ和HindⅡ購自寶生物公司。DAB顯色試劑盒購自南京建成生物試劑公司。
1?3 方法
1?3?1 正常前列腺、BPH 和前列腺癌的斑點(diǎn)雜交
①探針制備和標(biāo)記：bFGF 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、擴(kuò)增及提取，參照文獻(xiàn)〔4〕方法進(jìn)行，所得bFGF 質(zhì)粒經(jīng)EcoRⅠ和HindⅡ酶切回收探針片段。探針標(biāo)記采用熒光素標(biāo)記試劑盒隨機(jī)引物法。②細(xì)胞總RNA 提�。翰捎卯惲蚯杷犭乙徊椒ā＂跼NA斑點(diǎn)雜交：以相同濃度總RNA點(diǎn)膜。④檢測：采用試劑盒發(fā)光自顯影法檢測，顯影膠片應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)測定斑點(diǎn)平均吸光度( A) 值。
1?3?2 正常前列腺、BPH 和前列腺癌的免疫組化染色
鼠抗人bFGF mAb 孵育前，用微波爐進(jìn)行抗原修復(fù)10 min，鼠抗人bFGF mAb 的工作濃度1∶100。用PBS 代替鼠抗人bFGF mAb 作為陰性對照，以DAB顯色，透明封片。
1?4 判定標(biāo)準(zhǔn)
所有陽性染色特征為棕黃色顆粒，位于細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)。隨機(jī)觀察5～10 個視野，計(jì)算100 個腺上皮細(xì)胞或癌細(xì)胞陽性細(xì)胞數(shù)，取其均值。陽性細(xì)胞數(shù)＜10%者(-)，10%～29%者( )，30%～59%者(?)，≥60%者(?)。
1?5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
應(yīng)用SPSS10?0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)用x±s表示，采用χ2及秩和檢驗(yàn)。
2 結(jié)果
2?1 各組bFGF mRNA表達(dá)量比較
正常對照組中bFGF mRNA表達(dá)量低（23±11）， BPH組（178±29）和前列腺癌組（265±24）中bFGF mRNA表達(dá)較高。前列腺癌及BPH組織中mRNA表達(dá)水平與正常對照組之間比較差異顯著(P＜0?05) 。
2?2 不同分化程度的BHP組織中bFGF mRNA表達(dá)水平比較
BHPⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ度組織bFGF mRNA表達(dá)水平(pg/μl)分別為197±24（n=8）、186±27（n=12）、169±22（n=9）、188±31（n=11）。經(jīng)方差分析,4組組間bFGF mRNA的表達(dá)無明顯差異,提示bFGF mRNA的表達(dá)與BPH的分化無明顯關(guān)系。
2?3 不同分化程度的前列腺癌組織中bFGF mRNA表達(dá)水平比較
高、中、低分化的前列腺癌組織中bFGF mRNA表達(dá)水平(pg/μl)分別為273±28（n=15）、261±29（n=19）、254±20（n=14）。經(jīng)方差分析,三者bFGF mRNA的表達(dá)無明顯差異,提示bFGF mRNA的表達(dá)與前列腺癌的病理分級無明顯關(guān)系。
2?4 各組免疫組化染色結(jié)果比較
見圖1。正常對照組 bFGF呈陰性,BPH組陽性表達(dá)率為72?5%(29/40)，與正常對照組比較差異顯著(P＜0?05) 。BPH陽性病例中,陽性染色主要位于基質(zhì)細(xì)胞。前列腺癌組bFGF 的表達(dá)率為76?7%(36/48)，其中“ ”15 例,“?”19例,“?”14例，陽性染色位于癌細(xì)胞質(zhì),與正常對照組比較差異顯著(P＜0?05) 。bFGF 的染色強(qiáng)度與前列腺癌的病理分級、臨床分期及BPH 的分度均無圖1
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