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探析HCV檢測(cè)現(xiàn)狀及新進(jìn)展
摘要： 丙肝是嚴(yán)重威脅人類健康的傳染病之一，主要通過(guò)血液傳染。我國(guó)平均感染率為3.2%。北方稍高，約為4.6%，南方為2.6%～2.9%，感染人數(shù)估計(jì)有3700萬(wàn)。受感染的母親傳播給嬰兒的發(fā)生率為5%�；技毙愿窝缀蠹s有50%～70%的感染者有轉(zhuǎn)為慢性肝炎的傾向，重者20～25年后可轉(zhuǎn)化為肝硬化，肝硬化患者10年內(nèi)有大約30%的發(fā)展為終末期肝病[1-2]，并且HCV感染與原發(fā)性肝細(xì)胞癌有較密切的關(guān)系。對(duì)于HCV感染者，第3、5、7、10年的肝癌累積發(fā)生率達(dá)11%、18.1%、29%、45.6% [3]。隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的迅猛發(fā)展，HCV檢測(cè)技術(shù)也不斷提高．但與檢測(cè)乙型肝炎病毒（HBV）相比，HCV的檢測(cè)還有許多難題有待解決。關(guān)鍵詞： HCV 抗–HCV RNA ELISA RT-PCR
HCV檢測(cè)目前存在的主要問(wèn)題有：1.由于HCV抗原結(jié)構(gòu)的特殊性，直接檢測(cè)血清中HCV抗原的技術(shù)問(wèn)題還未徹底解決。2.抗體（抗－HCV）出現(xiàn)時(shí)間晚，從HCV感染后到抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)的時(shí)間平均為50～70天，有的患者可延長(zhǎng)至6～9個(gè)月，檢測(cè)的“窗口期”較長(zhǎng)。3.病毒基因型復(fù)雜而且容易變異，使基因水平的檢測(cè)質(zhì)量不夠穩(wěn)定。隨著有關(guān)人員近年來(lái)的不斷努力和相關(guān)科學(xué)的迅猛發(fā)展，已經(jīng)在HCV檢測(cè)技術(shù)方面有了重要進(jìn)展。
1 第三代抗－HCV試劑的應(yīng)用
檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體（抗HCV）仍是目前常用手段，這方面的檢測(cè)方法主要是第三代酶免疫測(cè)定法（EIA）或間接酶免疫法（ELISA），我國(guó)大多采用ELISA方法。
ELISA方法中包被抗原的組成和質(zhì)量是關(guān)鍵因素。第三代ELISA試劑比第一、第二代試劑有明顯的改進(jìn)，其包被的抗原為HCV核心抗原NS3、NS4和NS5。由于第一、第二代試劑的重組基因多肽抗原中仍有SOD多肽，所以都存在抗－SOD造成的假陽(yáng)性。而第三代HCV試劑，用中國(guó)北方地區(qū)HCV全基因序列，根據(jù)文獻(xiàn)開發(fā)的預(yù)測(cè)蛋白理化性質(zhì)及三級(jí)結(jié)構(gòu)和抗原決定簇的位點(diǎn)的序列軟件，完成了HCV全基因序列的親水性﹑親近性﹑移動(dòng)性分析，已預(yù)測(cè)到HCV抗原決定簇的位點(diǎn)。第三代試劑的特異性達(dá)到99%[4]。抗－HCV檢測(cè)可成為丙型肝炎病毒早期感染的檢測(cè)指標(biāo)[5]。
HCV感染通常是持續(xù)的終生感染。雖然第三代HCV抗體ELISA試劑增加了HCV Ns5區(qū)表達(dá)的蛋白作為抗原，提高了試劑敏感性，HCV感染的“窗口期”通常還需要平均40多天。因此，第三代ELISA試劑仍需要提高和改進(jìn)，例如在篩查試驗(yàn)的特異性方面，仍存在假陽(yáng)性結(jié)果。對(duì)強(qiáng)陽(yáng)性或弱陽(yáng)性樣本的檢測(cè)，國(guó)產(chǎn)試劑（主要廠家）的s/co值高于進(jìn)口試劑，但是無(wú)論對(duì)陽(yáng)性及陰性樣本檢測(cè)，國(guó)產(chǎn)試劑的CV值及特異性均明顯低于進(jìn)口試劑，以致出現(xiàn)更多的假陽(yáng)性結(jié)果。此外，丙肝抗體酶免試劑皆沒(méi)有灰區(qū)的設(shè)定，s/co比值較低（但大于１）的結(jié)果也報(bào)告陽(yáng)性，亦是假陽(yáng)性比較多的原因。[6]
2 丙型肝炎病毒抗原檢測(cè)方法的建立
多年來(lái)，專業(yè)人員一直探索能夠直接檢測(cè)HCV抗原，以達(dá)到縮短窗口期的目的。但是由于HCV抗原的特殊性和相關(guān)抗體制備中存在的困難，使這方面的進(jìn)展受到阻礙。
2.1 HCV核心抗原檢測(cè)
HCV核心抗原是HCV感染者體內(nèi)出現(xiàn)的早期感染指標(biāo)，幾乎與HCV RNA同時(shí)出現(xiàn)，核心抗原和HCV RNA的動(dòng)力學(xué)變化密切相關(guān)。
HCV核心抗原檢測(cè)用雙抗體夾心法定性或定量檢測(cè)血清樣品中的HCV核心抗原，其基本原理是：以基因工程核心抗原免疫小鼠后獲得的純抗HCV核心抗原單克隆抗體作為固相包被物，用與固相包被物有不同抗原決定簇的抗-HCV核心抗原單克隆抗體作為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記物，與血清中的HCV核心抗原反應(yīng)，OPD顯色后進(jìn)行定性或定量測(cè)定。該方法不受被檢測(cè)樣品中抗-HCV的干擾，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠�？捎糜贖CV早期急性丙型肝炎診斷，抗-HCV陽(yáng)性感染者的病毒血癥分析以及HCV感染者治療前后病毒血癥追蹤分析[7]。
有報(bào)道，HCV-CAg檢測(cè)可以較HCV抗體檢出時(shí)間提早23～46d[8]，且EIA法較PCR法簡(jiǎn)便、快速，現(xiàn)有能力開展ELISA檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室無(wú)需增加特殊設(shè)備，均可檢測(cè)。其結(jié)果與RT-PCR方法的復(fù)合率為85.71%。因此，在不具備RNA檢測(cè)條件的實(shí)驗(yàn)室開展HCV-CAg檢測(cè)時(shí)很好的篩查方法。有報(bào)道，在對(duì)180例抗-HCV陰性患者的篩查中，檢出HCV－CAg陽(yáng)性2例，表明僅用抗－HCV檢測(cè)將有可能存在0.55%感染者漏診的風(fēng)險(xiǎn)，尤其是對(duì)手術(shù)前丙肝病毒篩查的病例，它涉及到術(shù)中感染責(zé)任和用血安全等問(wèn)題。丙肝核心抗原檢測(cè)在一定程度上降低了這些風(fēng)險(xiǎn)。因此,丙肝核心抗原檢測(cè)可作為HCV抗體檢測(cè)的補(bǔ)充試劑。
2.2 HCV抗原檢測(cè)
十幾年來(lái)，一些學(xué)者曾經(jīng)試圖建立血清中各種HCV抗原的檢測(cè)方法，但由于血液中HCV抗原含量太低，用常規(guī)方法無(wú)法檢測(cè)出。近年來(lái)，由于HCV單克隆抗體的研究成功，已有國(guó)內(nèi)外學(xué)者發(fā)表了肝組織及人體分泌物中HCV抗原檢測(cè)成功的報(bào)導(dǎo)。如果能加強(qiáng)對(duì)HCV中和抗體Wv、抗-HCV-IgM、抗-HCV核心抗體的研究[9]，進(jìn)一步開發(fā)對(duì)血清及肝組織內(nèi)HCV抗原的測(cè)定，可能會(huì)在丙肝的實(shí)驗(yàn)診斷方面取得更大進(jìn)展。
3 丙型肝炎病毒RNA的檢測(cè)
現(xiàn)在用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)血清中的HCV RNA�；驹硎鞘紫冉�(jīng)逆轉(zhuǎn)錄酶作用，在特異性
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