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小腸結(jié)腸炎耶爾森菌生物學(xué)特性
調(diào)查寧夏小腸結(jié)腸炎耶爾森菌人群及動(dòng)物感染現(xiàn)狀,生物型別的分布及毒力基因攜帶情況.下面是小編搜集整理的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌生物學(xué)特性的論文范文，歡迎大家閱讀參考。
小腸結(jié)腸炎耶爾森菌生物學(xué)特性1
摘要：目的理解登封市2013年小腸結(jié)腸炎耶爾森菌生物學(xué)特性及宿主散布特征。辦法用傳統(tǒng)培育辦法別離小腸結(jié)腸炎耶爾森菌，并停止生化鑒定、血清分型和毒力基因PCR檢測(cè)。后果2013年采集標(biāo)本共1138份，別離出小腸結(jié)腸炎耶爾森菌169株，總檢出率爲(wèi)14.85%;其中豬標(biāo)本檢出率高達(dá)36.55%(114/394);生物型3型占86.39%(146/169)，均爲(wèi)O∶3血清型;毒力基因ail+、ystA+、yadA+、virF+占81.06%(137/169)，ail+、ystA+占5.33%(9/169)，ystB+占12.43%(21/169)，ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-占1.18%(2/169)。結(jié)論豬是小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的劣勢(shì)宿主;小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的血清型以O(shè)∶3型爲(wèi)主。
關(guān)鍵詞：小腸結(jié)腸炎耶爾森菌;毒力基因;生物分型;登封市小腸結(jié)腸炎
耶爾森菌(Yersiniaenterocolitica)是一種人獸共患性、食源性病原菌，可在冷藏溫度下生長(zhǎng)，普遍存在于自然界各種植物宿主[1-2]，包括牲畜、家禽、嚙齒植物、匍匐植物和水生植物等，其中豬、犬、牛等宿主與人群感染有重要關(guān)系，其可惹起胃腸道癥狀、呼吸零碎、心血管零碎和骨骼結(jié)締組織等部分組織或全身性疾患[3]。20世紀(jì)80年代中期，蘭州[4]和沈陽(yáng)市發(fā)作小腸結(jié)腸炎耶爾森菌盛行，感染病例達(dá)500例，惹起高度關(guān)注。2013年登封市擴(kuò)展對(duì)腹瀉患者、牲畜和家禽等監(jiān)測(cè)范圍，尤其是對(duì)屠宰場(chǎng)豬咽拭子、肛內(nèi)容物及食品等監(jiān)測(cè)范圍。對(duì)別離出的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌停止生物化學(xué)鑒定、血清學(xué)分型及PCR擴(kuò)增毒力基因等，理解小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的生物學(xué)特性及宿主散布特征，爲(wèi)預(yù)防控制小腸結(jié)腸炎耶爾森菌感染提供迷信根據(jù)。
一、資料與辦法
1.1樣原本源
2013年在登封市共采集各類標(biāo)本1138份。其中，在腹瀉監(jiān)測(cè)點(diǎn)采集腹瀉患者糞便569份;在各鄉(xiāng)鎮(zhèn)采集牲畜、家禽糞便標(biāo)本32份;在定點(diǎn)生豬屠宰場(chǎng)，用已消毒的棉拭子(特制加長(zhǎng))采集剛屠宰后生豬咽拭子及肛內(nèi)容物394份;采集市場(chǎng)待售肉制品143份。
1.2試劑及儀器
小腸結(jié)腸炎耶爾森菌選擇性培育基和配套抗生素爲(wèi)美國(guó)BD公司產(chǎn)品，0.1mol/L磷酸鹽緩沖溶液(pH7.4，改進(jìn)PBS)、克氏雙糖鐵瓊脂(KIA)、動(dòng)力吲哚尿素培育基(MIU)均購(gòu)自上海市疾病預(yù)防控制中心(CDC)，哥倫比亞養(yǎng)分瓊脂購(gòu)自英國(guó)Oxoid公司。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌分型血清購(gòu)自日本生研株式會(huì)社(包括O∶1、O∶2、O∶3、O∶5、O∶8和O∶9型)，菌株鑒定用的API20E生化板條及配套試劑均購(gòu)自法國(guó)生物梅里埃公司，PCR擴(kuò)增相關(guān)試劑及引物分解來自生工生物工程(上海)股份無限公司。PCR熱循環(huán)儀、電泳儀、瓊脂糖凝膠電泳成像儀均爲(wèi)美國(guó)BioBad公司產(chǎn)品。PCR擴(kuò)增用Premix、2000bpDNALadder(DL2000)均購(gòu)自TaKaRa公司。
1.3菌株的別離培育
將采集標(biāo)本于4℃冷增菌培育，辨別于7、14、21d后轉(zhuǎn)種于小腸結(jié)腸炎耶爾森菌選擇性培育基，25℃培育24～36h，挑取疑似菌落轉(zhuǎn)種于克氏雙糖斜面25℃培育24h，選擇克氏雙糖+/+、不產(chǎn)氣、H2S-，接種于尿素培育基及半固體培育基，選擇尿素酶+、25℃培育動(dòng)力+、37℃培育動(dòng)力-，鏡檢爲(wèi)革蘭陰性桿菌或橢圓或球桿菌細(xì)菌，運(yùn)用API20E腸道菌生化鑒定板條停止菌種鑒定[5-7]。
1.4生物分型及血清分型
生化反響是小腸結(jié)腸炎耶爾森菌鑒定的次要根據(jù)，同時(shí)將檢測(cè)后果作爲(wèi)生物分型的根據(jù)。詳細(xì)參照文獻(xiàn)[3]停止。對(duì)鑒定后果爲(wèi)小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的菌株參照文獻(xiàn)[8]停止血清學(xué)分型，設(shè)鹽水對(duì)照。1.5PCR檢測(cè)借助PCR檢測(cè)技術(shù)對(duì)小腸結(jié)腸炎耶爾森菌黏附侵襲點(diǎn)基因(ail)、耐熱性腸毒素基因(ystA)、生物1A型攜帶的腸毒素基因(ystB)、黏附素(yadA)、yop調(diào)理子轉(zhuǎn)錄活化作用因子(virF)等停止檢測(cè)。PCR產(chǎn)物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳別離(170V，30min)，引物序列參照文獻(xiàn)[9]停止。攜帶ail+、ystA+、yadA+、virF+、ail+或ystA+等基因的菌株?duì)?wèi)致病性菌株，攜帶ystB+、ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-基因的菌株?duì)?wèi)非致病性菌株。
二、后果
2.1標(biāo)本檢出狀況
2013年采集人、植物宿主糞便、豬咽拭子、豬肛拭子及食品標(biāo)本共1138份，小腸結(jié)腸炎耶爾森菌總檢出率爲(wèi)14.85%(169/1138)。腹瀉患者、犬、雞糞便的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢出率辨別爲(wèi)0.70%(4/569)、50.00%(2/4)和13.33%(2/15);豬咽拭子及肛內(nèi)容物小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的檢出率爲(wèi)36.55%(144/394)。食品樣品的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢出率爲(wèi)11.89%(17/143)。
2.2生物分型及血清學(xué)分型后果
169株小腸結(jié)腸炎耶爾森菌經(jīng)API20E生化鑒定板條鑒定，1A生物型占13.61%(23/169)，3型生物型占86.39%(146/169);因血清類型無限，10株菌未停止定型(5.92%)，O∶3血清型占86.39%(146/169)，O∶5血清型占7.69%(13/169)，見表1.
2.3毒力基因檢測(cè)狀況
對(duì)169株菌株ail、ystA、ystB、yadA和virF5種毒力基因停止檢測(cè)，ail+、ystA+、yadA+、virF+占81.06%(137/169)，ail+、ystA+占5.33%(9/169)，ystB+占12.43%(21/169)，ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-占1.18%(2/169)。
三、討論
小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的爆發(fā)盛行顯示均與食物相關(guān)[4]。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的致病性與散布在染色體和70kb質(zhì)粒編碼的毒力因子有關(guān)，且需兩因子共同作用使其進(jìn)入上層淋巴組織定殖，發(fā)揚(yáng)致病作用[10]。PCR擴(kuò)增的.5種毒力基因有ail、ystA、ystB、yadA、virF等，依據(jù)毒力基因攜帶狀況將小腸結(jié)腸炎耶爾森菌分爲(wèi)致病性菌株及非致病性菌株。2013年登封市別離小腸結(jié)腸炎耶爾森菌陽(yáng)性菌株169株，其致病性菌株(ail+、ystA+、yadA+、virF+、ystA+)占86.39%(146/169)，非致病性菌株(ystB+、ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-)占13.61%(23/169)，緣由爲(wèi)在本年度的監(jiān)測(cè)中，豬體內(nèi)的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢出率較高，且均爲(wèi)致病性菌株。闡明豬是該菌的劣勢(shì)宿主，且其體內(nèi)攜帶的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌大局部爲(wèi)致病性菌株，該后果與以往研討后果分歧[7]。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌血清型較多，我國(guó)報(bào)道的血清型達(dá)58個(gè)[11]，以O(shè)∶3、O∶5、O∶8和O∶9型菌株?duì)?wèi)主。近年來，O∶3型菌株的盛行呈上升趨向[12]。
本次監(jiān)測(cè)的宿主以O(shè)∶3血清型爲(wèi)主，占86.39%(146/169)。李洪民等[5]調(diào)查顯示，O∶3、O∶5血上清型均占13.48%(12株)，O∶8占15.73%(14株)。2011年登封市小腸結(jié)腸炎耶爾森菌以O(shè)∶3血清型爲(wèi)主，占81.87%(289株)[6]，與本調(diào)查后果分歧。小腸結(jié)腸炎耶爾森菌在自然界散布普遍，包括一切的牲畜、家禽和嚙齒類植物等。故登封市在以往的監(jiān)測(cè)根底上，應(yīng)持續(xù)展開牲畜、家禽、患者及重點(diǎn)宿主的帶菌情況調(diào)查。
本次調(diào)查牲畜豬體內(nèi)的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌檢出率高達(dá)36.55%，與相關(guān)報(bào)道分歧[9，13]。該后果對(duì)當(dāng)前的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌疫情防控有重要的迷信指點(diǎn)意義，應(yīng)增強(qiáng)小腸結(jié)腸炎耶爾森菌盛行知識(shí)的宣傳，尤其增強(qiáng)對(duì)豬的養(yǎng)殖者指點(diǎn)。志謝中國(guó)CDC傳染病預(yù)防控制所景懷琦研討員及其團(tuán)隊(duì)在課題完成進(jìn)程中給予協(xié)助。
小腸結(jié)腸炎耶爾森菌生物學(xué)特性2
小腸結(jié)腸炎耶爾森菌腸桿菌科耶爾森菌屬，為革蘭氏陰性小桿菌，有毒菌株多呈球桿狀，無毒株以桿狀多見。對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高，能在麥康凱瓊脂上生長(zhǎng)，但較其他腸道桿菌生長(zhǎng)緩慢，培養(yǎng)的最適宜溫度為28℃，最適pH值為7～8，初次培養(yǎng)菌落為光滑型，通過傳代接種后菌落可能呈粗糙型。
本菌具有“嗜冷性”，在水中和低溫下（4℃）能生長(zhǎng)，為腸道中能在4℃生長(zhǎng)繁殖的少數(shù)細(xì)菌之一。因此，食品冷藏保存時(shí)，應(yīng)防止被該菌污染。
野生動(dòng)物、家畜（豬、狗和貓）、牡蠣和水源中都能分離到本菌，亦可從健康人或患者糞便中分離得到，其傳播方式可能與攝入被尿、糞便污染的食物（尤其是肉類）和接觸感染動(dòng)物等有關(guān)。
本菌可產(chǎn)生耐熱腸毒素，121℃30分鐘不被破壞，對(duì)酸堿穩(wěn)定，pH1～11不失活。腸毒素產(chǎn)生迅速，在25℃下培養(yǎng)12小時(shí)，培養(yǎng)基上清液中即有腸毒素產(chǎn)生，24～48小時(shí)達(dá)高峰。腸毒素是引起腹瀉的主要因素。毒力型菌株均有VW抗原（蛋白脂蛋白復(fù)合物），為毒力的.重要因子，與侵襲力有關(guān)，侵襲力可能是耶爾森菌感染腸道表現(xiàn)的病理基礎(chǔ)。
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