銀黃顆粒微生物檢查方法
摘 要：對(duì)銀黃顆粒進(jìn)行微生物檢查的時(shí)候，要注意檢查方法的應(yīng)用，還要考慮銀黃顆粒的藥理藥性，采用限度檢查方法。在檢查方法建立之后，要對(duì)其方法進(jìn)行驗(yàn)證，根據(jù)有代表性的接種陽性菌株，然后利用常規(guī)法和薄膜過濾法驗(yàn)證，還可以采用稀釋法驗(yàn)證。其中，常規(guī)法的利用能達(dá)到一些效果，在金黃色葡萄球菌、黑曲霉菌以及大腸桿菌這些菌株的回收率上都超過了七層，而在白色念珠菌以及枯草桿菌的回收率上都在七層以下，對(duì)控制菌進(jìn)行檢查的時(shí)候也可以利用常規(guī)法，它是比較常用的一種檢查方法。本文分析了銀黃顆粒微生物實(shí)用的檢查方法。
關(guān)鍵詞：銀黃顆粒;檢查;微生物
銀黃顆粒是一種中成藥劑，其中含有的復(fù)合制劑是有很多種成分的，而且這里面的每一種成分都成起到抑菌的作用，在進(jìn)行微生物的限度檢查時(shí)這些成分也都會(huì)對(duì)檢查準(zhǔn)確性有一定的影響。銀黃顆粒的主要功效是清熱、消炎和解毒，在很多臨床醫(yī)療和日常實(shí)用上都會(huì)應(yīng)用這一藥劑。在對(duì)銀黃顆粒進(jìn)行微生物的心腹檢查時(shí)，首先要確定檢查的方法，然后再驗(yàn)證檢查方法，這樣做主要是證明這個(gè)檢查方法對(duì)于藥品的酵母菌數(shù)、霉菌等的測定檢查和控制菌的檢查能不能適用。結(jié)合權(quán)威的檢查提示，在對(duì)銀黃顆粒進(jìn)行微生物檢查的時(shí)候可以采用的方法并不是只有一種，下面詳細(xì)介紹一下。
一、儀器和材料
1.1 在選擇儀器的時(shí)候，要依據(jù)各項(xiàng)檢查要求來定，在我國通常都會(huì)選擇特定廠家生產(chǎn)的儀器，例如HTY-III型的智能集菌儀，這個(gè)儀器能很準(zhǔn)確檢查出相關(guān)的數(shù)據(jù)，有很大的實(shí)用價(jià)值。
1.2 在選擇檢查藥品上面，也有一定的要求，這里選擇的是每袋4g規(guī)格的銀黃顆粒。
1.3 培養(yǎng)基的選擇，針對(duì)不同的參數(shù)的檢查，選用的培養(yǎng)基也有不同，通常都是膽鹽乳培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基等等。
1.4 菌種的選擇，主要有大腸埃希氏菌、黑曲霉、金黃色葡萄球菌等。
二、方法驗(yàn)證
2.1 菌液制備
在選取菌液的時(shí)候，要選擇1ml的大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的肉湯液體、金黃色葡萄球菌，在溫度為34℃的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)的時(shí)間要在18小時(shí)到24小時(shí)之間，培養(yǎng)完成后還要在這些液體中加入0.9%氯化鈉溶液，加入的容量大約為9ml，再進(jìn)行10倍的稀釋，達(dá)到10-5到10-7左右，用于備用。下一步要選取1ml的白色念珠菌霉菌液體，在唯獨(dú)為24℃的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，這個(gè)培養(yǎng)的時(shí)間也要控制在18小時(shí)到24小時(shí)之間，培養(yǎng)完成后再在這些液體中加入0.9%氯化鈉溶液，加入的容量大約為9ml，再進(jìn)行10倍的稀釋，達(dá)到10-5留于備用。最后，還要選取黑曲霉菌斜面物，選取的標(biāo)準(zhǔn)是要經(jīng)過一周的培養(yǎng)之后的霉菌，然后在其中加入3ml的0.9%氯化鈉溶液，將孢子給洗下去，然后將其轉(zhuǎn)移到另一個(gè)空管中，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)比濁，這一步完成之后，再選取1ml的黑曲霉菌，將其放在0.9%氯化鈉溶液中進(jìn)行10倍稀釋，達(dá)到10-4的標(biāo)準(zhǔn)，留于備用。
2.2 檢驗(yàn)菌液
在菌液制備的過程中，對(duì)金黃色葡萄球菌和枯草桿菌，還有大腸埃希菌都進(jìn)行了稀釋，現(xiàn)將這些溶液的的10-5到10-7之間的稀釋液分別取出1ml，然后將它們放置在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行測定，對(duì)于這一培養(yǎng)基的溫度要求為45℃，選取的容量為20ml，這些要求都達(dá)到之后在注皿中進(jìn)行平行測定，要對(duì)兩個(gè)皿都測定，在溫度上的`要求為30℃到35℃之間，培養(yǎng)的時(shí)間應(yīng)該在48h左右，應(yīng)約為50cfu到100cfu之間。然后再選取之前稀釋過的白色念珠菌稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)在10-5到10-6之間，還要選取之前稀釋國的黑曲霉菌孢子懸液，標(biāo)準(zhǔn)在10-4左右，這兩種液體都選取1ml就可以，然后將它們放置在虎紅瓊脂培養(yǎng)基的注皿中進(jìn)行測定，溫度要控制在45℃左右，培養(yǎng)基容量要求是20ml，然后對(duì)兩個(gè)注皿進(jìn)行平行測定，完成后在進(jìn)行培養(yǎng)，溫度上的要求為23℃到28℃之間，并每天你都對(duì)其進(jìn)行觀察，大概要達(dá)到50cfu到100cfu這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。
2.3 供試液制備
取樣品10g，加pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100mL，混勻，作為1∶10的供試液。
2.4 回收率測定
2.4.1 細(xì)菌數(shù)霉菌數(shù)的常規(guī)法測定。首先進(jìn)行試驗(yàn)，選取1ml的供試液，含量比例在1：10左右，然后將50cfu到100cfu的試驗(yàn)菌也一起添加到平皿中，緊接著就要將瓊脂培養(yǎng)基導(dǎo)入里面，等到其凝固之后，將其放到規(guī)定的培養(yǎng)溫度中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間要在24小時(shí)到72小時(shí)之間，每天都要仔細(xì)觀察結(jié)果。其次進(jìn)行菌液測定，對(duì)每一個(gè)實(shí)驗(yàn)菌株都進(jìn)行測定。供試品對(duì)照組：取1∶10供試液1mL加入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)24～72h逐日觀察結(jié)果，測定供試品本底菌數(shù)。
2.4.2 細(xì)菌數(shù)霉菌數(shù)稀釋法測：①試驗(yàn)組：取1∶10供試液0.2mL/皿、50～ 100cfu試驗(yàn)菌同時(shí)加入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)24～ 72h逐日觀察結(jié)果。②菌液組：測定每一菌株所加的試驗(yàn)菌數(shù)。供試品對(duì)照組：取1∶10供試液0.2mL加入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)24～72h逐日觀察結(jié)果，測定供試品本底菌數(shù)。
2.4.3 霉菌數(shù)薄膜過濾法測定。取1∶10的供試液1mL，注入開放式濾器，用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜，每次100mL共4次留少量緩沖液加1mL(50～100cfu)試驗(yàn)菌混勻，濾干后取出濾膜菌面朝上貼入規(guī)定瓊脂平板培養(yǎng)基中，置規(guī)定溫度培養(yǎng)4天并逐日觀察。
2.5 回收率的計(jì)算
按如下公式計(jì)算試驗(yàn)組的加菌回收率：
試驗(yàn)組的加菌回收率=(試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)-供試品對(duì)照組的平均菌落數(shù))/菌液組的平均菌落數(shù)×100%
2.6 控制菌檢查方法的驗(yàn)證
取1∶10供試液10mL加入100mL膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，同時(shí)加入上述大腸埃希菌液1mL，置35℃培養(yǎng)24h，為試驗(yàn)組;取供試液10mL加入100mL膽鹽乳糖培養(yǎng)基，同時(shí)加入金黃色葡萄球菌液1mL，置35℃培養(yǎng)24h，作為陰性菌對(duì)照組。另取1∶10供試液1mL加入10mL膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基中，同時(shí)加入上述大腸埃希菌液1mL，置35℃培養(yǎng)24h;取1∶10供試液1mL加入10mL膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基中，同時(shí)加入金黃色葡萄糖球菌液1mL，置35℃培養(yǎng)24h。
三、結(jié)果
從上述的檢驗(yàn)結(jié)果可以看出：該供試品接種5株陽性試驗(yàn)菌株，常規(guī)法對(duì)枯草桿菌、白色念珠菌回收率均底于70%，對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、黑曲霉菌回收率均高于70%;稀釋法對(duì)枯草桿菌回收率均高于70%;薄膜過濾法對(duì)白色念珠菌回收率高于70%。
四、討論
銀黃顆粒首先采用常規(guī)法進(jìn)行驗(yàn)證，枯草桿菌、白色念珠菌回收率均底于70%，說明該樣品具有抑菌活性，第二步采用稀釋法進(jìn)行測定，枯草桿菌回收率高于70%，而白色念珠菌回收率仍低于70%，第三步采用薄膜過濾法沖洗量為400mL/筒進(jìn)行測定，白色念珠菌回收率高于70%，控制菌大腸埃希菌采用常規(guī)法進(jìn)行檢查。從而確定建立了銀黃顆粒微生物限度檢查方法細(xì)菌數(shù)需采用稀釋法進(jìn)行測定，霉菌數(shù)、酵母菌需采用薄膜過濾法沖洗量為400mL/筒進(jìn)行測定;控制菌大腸埃希菌采用常規(guī)法進(jìn)行檢查。
五、結(jié)束語
在對(duì)銀黃顆粒進(jìn)行微生物檢查的時(shí)候，采用科學(xué)的方法是非常重要的，在檢查的過程中要注意各個(gè)菌液的稀釋和試驗(yàn)，只要在試驗(yàn)成功之后才能進(jìn)行檢查，這樣能減少誤差，也能保證檢查的準(zhǔn)確性。
參考文獻(xiàn)：
[1]解翠珠.銀黃顆粒微生物檢查方法學(xué)驗(yàn)證[J].海峽藥學(xué)，2007.
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